現(xiàn)代肝炎病毒分子生物學(xué)

     目錄
   第一章 肝炎病毒的分子生物學(xué)概論
    第一節(jié) 分子生物學(xué)的理論和技術(shù)是肝炎病毒研究的重要手段
    一、丙肝病毒和戊肝病毒的發(fā)現(xiàn)從基因水平上取得突破
    二、分子生物學(xué)技術(shù)是肝炎病毒病原學(xué)檢測的重要手段
    三、HBVDNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞系的建立為HBV的研究提供了體外繁殖體系
    第二節(jié) 分子生物學(xué)技術(shù)是病毒性肝炎發(fā)病機(jī)制的研究手段
    一、分子雜交技術(shù)原位檢測肝炎病毒的核酸成分
    二、HBVDNA原位表達(dá)與HBcAg表達(dá)方式及其與病理改變的關(guān)系
    三、轉(zhuǎn)基因動物是研究HBV等肝炎病毒致病機(jī)制的合適的模型
    第三節(jié) 肝炎病毒的分子生物學(xué)研究可豐富分子生物學(xué)的理論
    一、HBVDNA復(fù)制是研究逆轉(zhuǎn)錄過程的一個很好的模型
    二、HBVDNA復(fù)制過程是研究轉(zhuǎn)錄物剪切加工機(jī)制的模型
    三、HBVDNA的研究也是基因表達(dá)調(diào)控的一個重要手段
    第四節(jié) 用分子生物學(xué)技術(shù)探索抗肝炎病毒治療的新途徑
    一、分泌抗病毒物質(zhì)的抗肝炎病毒基因治療
    二、利用肝炎病毒的反式調(diào)節(jié)機(jī)制探討抗肝炎病毒治療的新方法
    三、反義技術(shù)抗肝炎病毒治療方法
    第五節(jié) 肝炎病毒分子生物學(xué)內(nèi)容
    一、肝炎病毒的基因結(jié)構(gòu)和功能
    二、肝炎病毒基因表達(dá)和調(diào)控
    三、抗肝炎病毒新方法的探討
   第二章 甲型肝炎病毒的分子生物學(xué)
    第一節(jié) HAV基因結(jié)構(gòu)
    一、5′非翻譯區(qū)
    二、編碼區(qū)
    三、3′非翻譯區(qū)
    第二節(jié) HAV基因組編碼產(chǎn)物
    一、P1區(qū)
    二、P2區(qū)
    三、P3區(qū)
    第三節(jié) HAV的復(fù)制
    一、HAV體外增殖
    二、HAV在體內(nèi)的生活周期
    第四節(jié) HAV變異及分型
    一、HAV基因組核酸變異
    二、HAV氨基酸序列變異
    三、HAV分型
    第五節(jié) HAV抗原結(jié)構(gòu)
    第六節(jié) HAV減毒與細(xì)胞培養(yǎng)適應(yīng)化的分子基礎(chǔ)
    一、HAV野毒株與減毒株核苷酸比較
    二、2B和2C區(qū)基因突變
    三、5′－NTR對HAV體外生長的影響
    第七節(jié) HAV疫苗的研究進(jìn)展
    一、HAV滅活疫苗
    二、HAV減毒活疫苗
    三、基因工程疫苗
   第三章 乙肝病毒基因的結(jié)構(gòu)與功能
    第一節(jié) HBV基因組
    一、順向重復(fù)序列
    二、S基因區(qū)
    三、C基因區(qū)
    四、P基因區(qū)
    五、X基因區(qū)
    第二節(jié) HBV的復(fù)制
    一、HBV進(jìn)入肝細(xì)胞
    二、HBV細(xì)胞內(nèi)移行
    三、超螺旋雙鏈HBVDNA的形成
    四、HBVDNA前基因組的合成與裝配
    五、HBVDNA雙鏈的形成
    六、HBV顆粒的裝配與釋放
    第三節(jié) HBVDNA的轉(zhuǎn)錄
    第四節(jié) HBV結(jié)構(gòu)蛋白
    一、包膜蛋白
    二、核心區(qū)蛋白
    三、HBVDNA多聚酶蛋白
    四、HBV的X蛋白
   第四章 丙肝病毒的分子生物學(xué)
    第一節(jié) HCV基因的克隆化
    一、HCV是一種RNA病毒
    二、5－1－1片段的克隆
    三、HCV基因組克隆化的意義
    第二節(jié) 丙肝病毒的基因結(jié)構(gòu)
    一、丙肝病毒基因的一級結(jié)構(gòu)
    二、中國河北株與美、日株一級結(jié)構(gòu)的比較
    三、中國丙型肝炎病毒河北流行株和上海流行株核苷酸序列的比較
    四、中國丙型肝炎病毒基因組克隆的方法
    第三節(jié) HCV基因組變異及分型
    一、HCV基因組分型的基礎(chǔ)
    二、HCV基因組分型的方法
    三、HCV基因組分型的意義
    第四節(jié) 丙肝病毒蛋白的翻譯
    一、HCV蛋白編碼的基因結(jié)構(gòu)
    二、核糖體與HCV5′－NTR結(jié)合的方式
    三、HCV病毒蛋白的裂解產(chǎn)物
    四、HCV病毒多蛋白的裂解酶NS3
    第五節(jié) 丙肝病毒感染的分子診斷
    一、HCV基因組擴(kuò)增技術(shù)
    二、重組HCV抗原
    三、人工合成HCV抗原
    四、第一代抗－HCV檢測方法
    五、第二代抗－HCV檢測方法
    六、抗－HCVIgM的檢測
    七、HCV核酸和蛋白的原位表達(dá)
   第五章 丁型肝炎病毒的分子生物學(xué)
    第一節(jié) HDV的結(jié)構(gòu)特性
    第二節(jié) HDV的基因組和抗基因組
    一、HDV基因組的一級結(jié)構(gòu)的發(fā)現(xiàn)
    二、HDV抗基因組RNA
    第三節(jié) HDV的復(fù)制
    一、研究HDV基因組復(fù)制的實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)
    二、HDVRNA復(fù)制的代謝需要
    三、亞基因組mRNA
    四、翻譯
    五、嗜肝DNA病毒在HDV基因組復(fù)制中的作用
    六、HDAg在HDV復(fù)制中的作用
    七、自身裂解
    八、自連
    九、HDV（復(fù)制）對HBV的影響
    第四節(jié) HDV的蛋白質(zhì)
    一、HDAg的一般特性
    二、兩種蛋白的結(jié)構(gòu)區(qū)及意義
    三、HDAg′的發(fā)現(xiàn)及特性
    四、28kDa的發(fā)現(xiàn)
    第五節(jié) HDV的分子生物學(xué)內(nèi)容在診斷、治療及預(yù)防等中的應(yīng)用
    一、診斷上的應(yīng)用
    二、治療上的應(yīng)用
    三、預(yù)防上的應(yīng)用
    四、其它的應(yīng)用
   第六章 戊型肝炎病毒的分子生物學(xué)
    第一節(jié) HEV基因片段的克隆化
    一、原始材料
    二、HEVcDNA克隆化實(shí)驗(yàn)流程
    三、HEVcDNA克隆的結(jié)果
    四、HEVcDNAET1.1成功的意義
    第二節(jié) HEV基因組的結(jié)構(gòu)
    一、HEV核苷酸的一級結(jié)構(gòu)
    二、HEVcDNA全序列克隆策略
    三、不同株的一級序列比較
    四、戊肝病毒基因組與其它肝炎病毒基因組的比較
    五、HEVRNA的二級結(jié)構(gòu)
    第三節(jié) HEV基因組表達(dá)研究
    一、HEVRNA開放讀框分析
    二、翻譯方式
    三、HEV抗原的表位
    第四節(jié) HEV基因重組表達(dá)與突變
    一、HEV蛋白在克隆載體中的表達(dá)
    二、HEV病毒蛋白融合基因的表達(dá)
    三、HEV基因組的變異與突變
    第五節(jié) HEV的生活周期與體外培養(yǎng)
    一、HEV的生活周期
    二、HEV的細(xì)胞培養(yǎng)
    第六節(jié) HEV的分子免疫學(xué)
    一、HEV病毒抗原
    二、HEV病毒蛋白的抗原決定簇
    三、HEV抗原在肝臟中的表達(dá)
    四、HEV表達(dá)人B細(xì)胞抗原表位
   第七章 庚型肝炎病毒和GB病毒的分子生物學(xué)
    一、概況
    二、GBVs和HGV的基因構(gòu)成及相應(yīng)特性
    三、GBVs和HGV的結(jié)構(gòu)蛋白
   第八章 乙肝病毒DNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞系的建立和應(yīng)用
    第一節(jié) HBVDNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞系的建立
    一、HBVDNA目的基因
    二、靶細(xì)胞的選擇
    三、基因轉(zhuǎn)移方法
    第二節(jié) HBVDNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞系復(fù)制和表達(dá)的特點(diǎn)
    一、HBVDNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞系中HBVDNA的存在狀態(tài)
    二、HBVDNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞系中HBVDNA復(fù)制特點(diǎn)
    三、HBVDNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物
    四、HBV蛋白的表達(dá)
    五、轉(zhuǎn)染細(xì)胞中HBVDNA表達(dá)調(diào)控
    六、HBV顆粒的裝配
    第三節(jié) 乙肝病毒基因組轉(zhuǎn)染細(xì)胞系的應(yīng)用
    一、HBV結(jié)構(gòu)基因的表達(dá)
    二、HBVDNA調(diào)控研究
    三、HBVDNA突變研究
    四、HBV致病機(jī)制研究
    五、HBV感染與肝細(xì)胞癌的關(guān)系
    六、HBVDNA的轉(zhuǎn)染在HDV研究中的應(yīng)用
    第四節(jié) 轉(zhuǎn)染細(xì)胞系在抗HBV藥物研究中的應(yīng)用
    一、病毒基因組復(fù)制
    二、病毒的轉(zhuǎn)錄
    三、蛋白的表達(dá)
    四、藥物結(jié)構(gòu)和抗HBV活性關(guān)系
   第九章 乙肝病毒的基因突變研究
    第一節(jié) 人工突變研究方法
    一、直接的缺失與插入突變
    二、系列缺失突變體構(gòu)建
    三、人工合成方法
    四、PCR擴(kuò)增法
    五、寡核苷酸定點(diǎn)誘變
    六、盒式突變
    第二節(jié) 直接重復(fù)序列的突變
    一、突變體的構(gòu)建
    二、DR區(qū)突變的意義
    第三節(jié) SORF基因突變
    一、前S1區(qū)突變
    二、前S2基因突變
    三、S基因突變
    第四節(jié) CORF區(qū)基因突變
    一、前C區(qū)突變
    二、C區(qū)突變
    第五節(jié) PORF和XORF的突變
    一、PORF的突變
    二、XORF的突變
   第十章 乙肝病毒復(fù)制和表達(dá)的調(diào)控
    第一節(jié) 基因調(diào)控的研究方法
    一、S1核酸酶作用
    二、引物延伸實(shí)驗(yàn)
    三、基因突變法
    四、體外轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)
    五、報(bào)道基因技術(shù)
    六、異種啟動子表達(dá)實(shí)驗(yàn)
    七、尾隨序列的置換與突變
    第二節(jié) HBV基因調(diào)節(jié)的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)
    一、增強(qiáng)子序列
    二、HBV基因的啟動子
    第三節(jié) HBVDNA復(fù)制的調(diào)節(jié)
    一、HBVDNAP突變與HBVDNA復(fù)制
    二、前基因組RNA轉(zhuǎn)位與HBVDNA復(fù)制
    三、HDV基因共轉(zhuǎn)染對HBV復(fù)制的影響
    四、影響HBVDNA復(fù)制的細(xì)胞因子
    第四節(jié) HBVDNA轉(zhuǎn)錄物的剪切與調(diào)節(jié)
    一、HBVDNA轉(zhuǎn)錄物的種類和功能
    二、HBVDNA轉(zhuǎn)錄物剪切現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn)
    三、HBVDNA轉(zhuǎn)錄物剪切機(jī)制
    四、HBVDNA轉(zhuǎn)錄物的剪切特點(diǎn)
   第十一章 乙肝病毒與細(xì)胞因子
    第一節(jié) 影響HBVDNA表達(dá)調(diào)控的細(xì)胞因子
    一、HBV感染的免疫應(yīng)答
    二、細(xì)胞因子的應(yīng)答
    三、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子的應(yīng)答
    第二節(jié) 干擾素與乙肝病毒
    一、HBV感染導(dǎo)致IFN系統(tǒng)的改變
    二、干擾素對HBV復(fù)制與表達(dá)的影響
    三、HBVDNA的復(fù)制和表達(dá)對IFN的影響
    第三節(jié) 白細(xì)胞介素－2與乙肝病毒
    一、IL2抗病毒作用的發(fā)現(xiàn)
    二、ILL2的抗乙肝病毒作用
    三、IL－2抗HBV作用的機(jī)制
    四、IL－2轉(zhuǎn)基因表達(dá)抗病毒基因治療的優(yōu)勢
   第十二章 肝炎病毒與肝細(xì)胞癌
    第一節(jié) 肝炎病毒致肝細(xì)胞癌的證據(jù)
    一、病因?qū)W
    二、流行病學(xué)
    三、動物模型和轉(zhuǎn)基因動物
    四、轉(zhuǎn)染細(xì)胞的模型
    五、肝炎病毒與癌基因的激活
    第二節(jié) HBVDNA整合與HCC
    一、HBVDNA在肝細(xì)胞基因中的整合
    二、HBVDNA整合與HCC間的相互關(guān)系
    三、HBVDNA整合區(qū)的細(xì)胞基因重排
    四、乙型肝炎病毒致原發(fā)性肝癌模式
    第三節(jié) HBVDNAX基因與HCC
    一、X基因ORF的結(jié)構(gòu)和作用
    二、X抗原對癌基因的激活
    三、X基因研究的意義
    第四節(jié) 癌基因與HCC
    一、抗癌基因P53與肝細(xì)胞癌
    二、癌基因與肝細(xì)胞癌
    第五節(jié) HCV和HCC
    一、原發(fā)性肝癌的抗－］HCV檢測
   第十三章 乙肝病毒蛋白質(zhì)的基因工程表達(dá)
    第一節(jié) HBV蛋白基因工程表達(dá)的條件
    一、表達(dá)細(xì)胞宿主
    二、表達(dá)載體
    三、HBVDNA基因片段
    第二節(jié) 原核細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)
    第三節(jié) 酵母菌表達(dá)系統(tǒng)
    一、常用的酵母克隆載體
    二、啟動子的選擇
    第四節(jié) 哺乳動物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)
    一、表達(dá)的策略
    二、小蛋白的表達(dá)
    三、中蛋白的表達(dá)
    四、大蛋白的表達(dá)
    第五節(jié) 非包膜蛋白的基因工程表達(dá)
    一、核心基因的表達(dá)
    二、多聚酶的表達(dá)及HBxAg的表達(dá)
   第十四章 乙肝病毒轉(zhuǎn)基因小鼠
    第一節(jié) 轉(zhuǎn)基因動物的發(fā)展
    一、早期的轉(zhuǎn)基因動物
    二、轉(zhuǎn)基因動物中基因的表達(dá)
    三、外源基因的表達(dá)對轉(zhuǎn)基因動物的影響
    第二節(jié) 轉(zhuǎn)基因動物的建立方法
    一、外源基因的準(zhǔn)備
    二、生殖細(xì)胞的準(zhǔn)備
    三、外源基因?qū)胧芫训姆椒?br />     四、受體動物的準(zhǔn)備及轉(zhuǎn)導(dǎo)受精卵的植入
    五、轉(zhuǎn)基因動物的鑒定
    第三節(jié) 轉(zhuǎn)基因動物的應(yīng)用
    一、腫瘤研究
    二、免疫學(xué)研究
    三、動物品種的改良
    四、基因表達(dá)的調(diào)節(jié)和控制
    五、生物工廠
    第四節(jié) 乙肝病毒轉(zhuǎn)基因小鼠
    一、乙肝病毒概況
    二、乙肝病毒轉(zhuǎn)基因小鼠的建立
    三、病毒基因表達(dá)的調(diào)控
    四、病毒基因組的復(fù)制
    五、病毒蛋白的合成
    六、轉(zhuǎn)基因動物中的HBV致病性
    七、重排序列的不穩(wěn)定性
   第十五章 肝炎病毒基因組的PCR擴(kuò)增
    第一節(jié) PCR技術(shù)的原理
    一、PCR技術(shù)的理論根據(jù)
    二、PCR技術(shù)的基本過程
    三、PCR技術(shù)的影響因素
    四、PCR技術(shù)的類型
    第二節(jié) 幾種新型的PCR技術(shù)
    一、定量PCR技術(shù)
    二、原位PCR技術(shù)
    三、SISPAPCR技術(shù)
    第三節(jié) HCVRNA定量PCR技術(shù)
    一、標(biāo)本的倍比稀釋法
    二、競爭性逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)
    三、放射性核素?fù)饺敕?br />     四、HCVRNA定量檢測的應(yīng)用
    第四節(jié) PCR技術(shù)在乙肝病毒研究中的應(yīng)用
    一、檢測微量HBVDNA
    二、抗病毒療效的評價
    三、用于HBsAg亞型的研究
    四、血液及血制品安全性的研究
    五、鑒定HBsAg陰性的HBV感染者
   第十六章 抗肝炎病毒的基因治療
    第一節(jié) 基因治療概述
    一、基因治療的策略
    二、基因治療的條件
    三、基因治療的操作步驟
    四、影響基因治療的因素
    五、病毒性肝炎基因治療的整體構(gòu)想
    第二節(jié) 細(xì)胞內(nèi)免疫抗病毒基因治療
    一、細(xì)胞因子轉(zhuǎn)基因表達(dá)
    二、抗病毒蛋白的轉(zhuǎn)基因表達(dá)
    三、病毒特異性抗體轉(zhuǎn)基因表達(dá)
    四、反式調(diào)節(jié)機(jī)制抗病毒基因治療
    五、反義技術(shù)抗病毒基因治療
    第三節(jié) 細(xì)胞自殺機(jī)制的抗病毒基因治療
    一、細(xì)胞自殺機(jī)制設(shè)計(jì)思路
    二、病毒主導(dǎo)性酶藥物預(yù)施療法
    三、白喉毒素的轉(zhuǎn)基因表達(dá)
    四、細(xì)胞程序化死亡機(jī)制
    五、細(xì)胞自殺機(jī)制設(shè)計(jì)的應(yīng)用
   第十七章 抗肝炎病毒的反義技術(shù)
    第一節(jié) 反義技術(shù)的概念
    一、反義技術(shù)的定義
    二、原核細(xì)胞中的反義分子
    三、真核細(xì)胞中的反義分子
    第二節(jié) 反義分子的種類和來源
    一、反義分子的種類
    二、反義分子的來源
    第三節(jié) 反義技術(shù)的原理和應(yīng)用
    一、反義技術(shù)的原理
    二、反義技術(shù)的應(yīng)用
    第四節(jié) 反義技術(shù)抗肝炎病毒的作用靶位
    一、甲肝病毒基因組位點(diǎn)
    二、乙肝病毒基因組位點(diǎn)
    三、丙肝病毒基因組位點(diǎn)
    四、丁肝病毒基因組位點(diǎn)
    五、戊型肝炎病毒基因組位點(diǎn)
   第十八章 抗肝炎病毒的寡核苷酸
    第一節(jié) 寡聚核苷酸的種類
    一、n－ODN
    二、修飾的ODN
    三、ODN與其它反應(yīng)基團(tuán)的結(jié)合
    第二節(jié) 反義寡核苷酸的作用機(jī)制
    一、反義寡核苷酸的作用靶分子
    二、反義寡核苷酸的作用類型
    第三節(jié) 反義寡核苷酸的藥代動力學(xué)
    一、一般原理
    二、定量分析方法
    三、體外資料
    四、體內(nèi)資料
    五、藥物毒性
    第四節(jié) 寡核苷酸的合成
    一、反義寡核苷酸人工合成的發(fā)展
    二、核昔酸合成的策略
    三、核酸小片段的化學(xué)合成
    四、核酸小片段的酶促合成法
   第十九章 抗肝炎病毒的核酶技術(shù)
    第一節(jié) 核酶概述
    一、核酶的發(fā)現(xiàn)
    二、核酶的基本結(jié)構(gòu)
    三、核酶裂解反應(yīng)條件
    四、核酶催化的酶學(xué)性質(zhì)
    五、核酶RNA的來源
    第二節(jié) 核酶的分子設(shè)計(jì)
    一、靶鏈的選擇
    二、裂解位點(diǎn)
    三、側(cè)翼序列
    四、活性中心化學(xué)修飾
    五、載體序列
    六、啟動子序列
    七、順式和反式核酶
    八、二級結(jié)構(gòu)
    第三節(jié) 抗肝炎病毒的應(yīng)用
    一、抗HAVRNA核酶技術(shù)
    二、抗HBV核酶技術(shù)
    三、抗HDV核酶技術(shù)
   索引