神經(jīng)藥理學研究技術與方法

第1章 神經(jīng)細胞培養(yǎng)與檢測
第1節(jié) 概述
第2節(jié) 培養(yǎng)神經(jīng)細胞的設備與材料
一、 實驗室
二、 實驗設備
三、 實驗材料
第3節(jié) 神經(jīng)細胞培養(yǎng)類型
一、器官培養(yǎng)
二、組織塊培養(yǎng)
三、細胞分離培養(yǎng)
第4節(jié) 神經(jīng)細胞原代分散培養(yǎng)
四、 神經(jīng)細胞培養(yǎng)的準備
五、 神經(jīng)細胞的分散培養(yǎng)（方案之一）
六、 神經(jīng)細胞的分散培養(yǎng)（方案之二）
七、 分離細胞懸液的接種密度和活性評估
八、 培養(yǎng)神經(jīng)細胞的形態(tài)學觀察
九、 培養(yǎng)神經(jīng)細胞的鑒別與定性
十、 神經(jīng)膠質細胞培養(yǎng)
第5節(jié) 神經(jīng)細胞株培養(yǎng)
一、 細胞株培養(yǎng)
二、 神經(jīng)膠質細胞及細胞株的再培養(yǎng)與保存
第6節(jié) 培養(yǎng)神經(jīng)細胞的病理模型
一、低糖低氧模型
二、過氧化氫（H2O2）損傷模型
三、高鉀毒性模型
四、谷氨酸毒性模型
五、NO毒性模型
六、Aβ毒性模型
第7節(jié) 培養(yǎng)神經(jīng)細胞的測定指標與方法
一、形態(tài)學觀察
二、細胞活力測定
三、蛋白總量分析
四、DNA損傷檢測
五、羰基化蛋白檢測
六、電生理特性測定
七、培養(yǎng)神經(jīng)細胞的受體反應
八、培養(yǎng)神經(jīng)細胞的突觸反應
九、培養(yǎng)神經(jīng)細胞電特性測定方法和離子通道的膜片鉗測定方法
十、免疫組化研究
第8節(jié) 細胞懸液標本蛋白質定量方法
一、凱氏定氮法
二、雙縮脲法
三、Folin (福林)-酚試劑法
四、紫外分光光度法
五、考馬斯亮藍G-250染色法
六、BCA法
第9節(jié) 培養(yǎng)神經(jīng)細胞的藥理學研究方法評價
第2章 神經(jīng)細胞凋亡
第1節(jié) 概述
第2節(jié) 神經(jīng)細胞凋亡模型制作方法
一、 大腦皮層或海馬神經(jīng)元的原代培養(yǎng)
二、 小腦顆粒神經(jīng)細胞的原代培養(yǎng)
三、 神經(jīng)細胞凋亡模型
第3節(jié) 抗神經(jīng)細胞凋亡藥理學研究指標與方法
一、細胞形態(tài)學研究方法
二、生化學研究方法
三、分子生物學研究方法
四、末端標記法
第4節(jié) 抗神經(jīng)細胞凋亡研究方法評價
第3章 神經(jīng)遞質、調質和神經(jīng)肽
第1節(jié) 概述
第2節(jié) 神經(jīng)標本制備
一、 試劑與設備
二、腦勻漿（homogenate）制備
三、突觸小體（synaptosome）制備
四、粗制線粒體的制備
五、離體腦片制備
第3節(jié) 單胺類遞質攝取的測定
第4節(jié) 離體腦組織單胺類神經(jīng)遞質及其代謝產(chǎn)物測定法
一、HPLC-EC檢測法
二、氣相色譜測定法
三、熒光分光光度測定法
四、同位素測定法
第5節(jié) 腦內組胺測定方法
一、生物檢定法
二、熒光測定法
第6節(jié) 松果體褪黑素的高效液相測定
第7節(jié) 腦內氨基酸的測定方法
一、自動分析儀測定法
二、高效液相色譜測定法
三、熒光法測定腦細胞谷氨酸釋放
四、血、腦色氨酸和酪氨酸熒光微量測定法
第8節(jié) 在體腦組織遞質釋放研究方法
一、推挽灌流法
二、腦內微透析法
第9節(jié) 放射受體分析法測定配體和肽類物質
第10節(jié) 腦內啡肽的測定方法
一、放射受體分析法
二、放射免疫分析法
第11節(jié) P物質放射免疫測定方法
第12節(jié) 乙酰膽堿的檢測
一、HPLG-RE-ECD法測定乙酰膽堿
二、乙酰膽堿的放射免疫測定法
三、全血膽堿酯酶活性測定
第4章 神經(jīng)細胞內鈣及鈣結合蛋白
第1節(jié) 細胞內游離鈣的測定
一、鈣的生理及病理學意義
二、細胞內Ca2+的調節(jié)及鈣通道類型
三、實驗標本制備
四、細胞內游離Ca2+ 測定
第2節(jié) 細胞內鈣釋放
一、放射性標記法測定內鈣釋放
二、熒光分光光度法測定三磷酸肌醇刺激的內鈣釋放
第3節(jié) 鈣結合蛋白
一、 鈣調素
二、鈣結合蛋白
三、鈣調素結合蛋白
第4節(jié) 整體動物腦細胞外鉀、鈣離子水平測定（連曉媛）
一、雙管離子選擇電極制備
二、標準曲線制備
三、細胞外K＋或Ca2＋水平測定
四、應用實例-膠質細胞毒素對腦細胞外鉀離子水平的影響
第5章 腦能量代謝與線粒體功能
第1節(jié) 概述
第2節(jié) 能量代謝研究方法
一、腦線粒體提取制備
二、線粒體呼吸功能測定
三、線粒體呼吸鏈酶復合體活性測定
四、ATP酶活性測定
五、抗氧化酶（SOD）活性測定
六、線粒體膜電位（ΔΨ）的測定
七、線粒體內游離鈣測定
八、線粒體細胞色素C含量測定
九、膜流動性測定
十、線粒體鑒定
十一、線粒體腫脹測定
十二、線粒體活性成分測定（GSH，GSH-PX，MDA，ATP）
十三、刃天青法檢測線粒體功能
第6章 神經(jīng)細胞氧化性應激
第1節(jié) 概述
第2節(jié) 脂質過氧化產(chǎn)物測定
一、過氧化脂質（LPO）測定
二、腦細胞膜流動性檢測
三、脂褐素測定
四、脂質過氧化氫含量測定
五、谷胱甘肽 (GSH) 測定
第3節(jié) 過氧化酶活性測定
一、超氧化物歧化酶 (SOD) 活性測定
二、過氧化氫酶 (CAT) 活性測定
三、過氧化物酶 ( POD) 活性測定
四、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性測定
五、單胺氧化酶活性測定
第4節(jié) 自由基濃度測定
一、DMSO氧化生成甲醛分光光度法
二、化學發(fā)光法
三、高效液相（HPLC）電化學檢測法
四、順磁共振法
五、自由基捕捉技術
第7章 神經(jīng)應激與一氧化氮及一氧化碳
第1節(jié) 一氧化氮及其合成酶
一、 概述
二、電化學方法
二、 Griess反應法
三、 正鐵血紅蛋白分光光度法
五、魯米諾化學發(fā)光法
六、熒光檢測法
七、高效液相色譜法
八、高壓液相熒光檢測法測定神經(jīng)元突觸體胞液NOS活性
九、電子順磁共振
十、NADPH-黃遞酶（NADPH-d）組化染色法
十一、免疫組織（細胞）化學法
十二、原位雜交等分子生物學技術
十三、NO間接測定法-L-Arg轉化實驗
十四、cGMP測定法
十五、生物學方法
十六、細胞內NO濃度（[NO]i）測定
十七、NO3-（過氧亞硝酸根離子）測定
十八、NO毒性實驗
第2節(jié) 一氧化碳及其合成酶
一、 概述
二、CO的生物來源和代謝過程
三、調控CO產(chǎn)生的方法
四、CO的測定方法
五、血紅素氧合酶的測定技術
六、CO的神經(jīng)作用觀察方法
第8章 神經(jīng)營養(yǎng)因子
第1節(jié) 概述
第2節(jié) 神經(jīng)營養(yǎng)物質及其受體
一、神經(jīng)營養(yǎng)物質
二、神經(jīng)營養(yǎng)物質受體
三、神經(jīng)營養(yǎng)物質的生理作用
四、神經(jīng)營養(yǎng)物質和突觸可塑性
五、神經(jīng)營養(yǎng)物質和Trk受體基因敲除小鼠
第3節(jié) 神經(jīng)生長因子的純化
一、鼠的NGF
二、人(-NGF的純化
第4節(jié) 體外神經(jīng)營養(yǎng)因子的活性測定
一、神經(jīng)突起向外生長的測定
二、體外培養(yǎng)細胞中神經(jīng)營養(yǎng)因子活性的測定
第5節(jié) 神經(jīng)營養(yǎng)物質的提取和定量
一、神經(jīng)營養(yǎng)物質的提取
二、神經(jīng)營養(yǎng)物質的酶聯(lián)免疫分析
第6節(jié) 神經(jīng)營養(yǎng)物質mRNA的定量
一、實驗前準備
二、實驗步驟
三、注意事項
第7節(jié) 免疫組織化學法檢測神經(jīng)營養(yǎng)物質在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的表達
一、實驗前準備
二、實驗過程
三、注意事項
第9章 神經(jīng)干細胞
第1節(jié) 概述
第2節(jié) 相關概念
第3節(jié) 神經(jīng)干細胞研究方法學
一、神經(jīng)干細胞培養(yǎng)
二、神經(jīng)干細胞的冷凍保藏與復蘇
三、神經(jīng)干細胞的免疫組織化學鑒定法
第10章 神經(jīng)細胞離子通道電生理學
第1節(jié) 玻璃微電極細胞內記錄技術
一、細胞內記錄技術基本原理
二、活體細胞內記錄及染色技術
三、細胞內記錄技術的潛在誤差及局限性
第2節(jié) 神經(jīng)細胞膜片鉗技術原理及方法
一、膜片鉗技術原理
二、離子通道電流的記錄方法
三、神經(jīng)細胞離子通道的研究
四、電流和電壓的命名規(guī)則
第3節(jié) 腦片膜片鉗研究技術與方法
一、腦片膜片鉗技術簡介
二、腦片膜片鉗技術方法
三、腦片膜片鉗技術的優(yōu)點
四、海馬腦片盲法膜片鉗技術
第11章 神經(jīng)系統(tǒng)受體
第1節(jié) 概述
第2節(jié) 受體結合的研究方案
第3節(jié) 膜片放射配體受體結合實驗
一、放射配體的選擇
二、組織的選擇和制備
三、緩沖液和佐劑
四、非特異性結合的測定
五、孵育條件
六、放射配體-受體復合體與游離放射配體的分離
七、飽和動力學研究
八、競爭性結合數(shù)據(jù)的計算
九、ex vivo和在體結合技術
第4節(jié) 腦片受體結合的放射自顯影方法與技術
一、冰凍腦片的制備
二、放射性配基結合
三、放射自顯影
四、顯微測密度術定量分析圖像
第5節(jié) 神經(jīng)受體實驗方法與技術
一、腎上腺素受體
二、多巴胺受體
三、M膽堿能受體
四、5-HT受體
五、組織胺H1受體
六、嗎啡受體
七、苯二氮zaozi001受體
八、γ-氨基丁酸(GABA) 受體
九、氯離子通道開放實驗
十、l,4-雙氫吡啶（DHP）鈣通道受體
第6節(jié) 神經(jīng)受體藥理學研究方法評價
第12章 神經(jīng)細胞內信號傳導
第1節(jié) 概述
第2節(jié) G蛋白的分離純化及測定
一、G蛋白提取及純化
二、G蛋白活性檢測
第3節(jié) 環(huán)核苷酸測定
一、cAMP熒光測定法
二、cAMP蛋白質競爭結合法
三、cGMP放射免疫測定
第4節(jié) 肌醇磷脂測定
一、[3H]肌醇標記測定肌醇磷脂及PLC活性
二、特異受體結合法測定1,4,5-IP3
第5節(jié) 酪氨酸激酶測定-活細胞及細胞膜樣本32P標記
第6節(jié) 蛋白激酶C的純化和活性測定
一、蛋白激酶C的提取和純化
二、蛋白激酶C活性的測定
第7節(jié) 細胞間隙連接結構及功能
一、間隙連接蛋白的分離與純化
二、電鏡觀察細胞間隙連接通道的方法
三、免疫熒光染色技術
四、染料或同位素示蹤分子法
五、代謝試驗
第13章 免疫學方法在神經(jīng)藥理學研究中的應用
第1節(jié)　概述
第2節(jié)　免疫組織（細胞）化學法
一、基本原理
二、標記（染色）方法
三、秋水仙素對免疫組化染色結果的影響
四、酶消化
四、 抗體稀釋度和效價
五、 免疫組化的非特異性染色和交叉反應
六、 免疫組織化學染色的對照實驗
七、 免疫組化方法的基本過程
八、 免疫組化技術在神經(jīng)藥理學研究中的應用實例
九、 免疫組化雙重染色技術
十、 受體定位技術
十一、免疫電子顯微鏡技術
第3節(jié) 酶聯(lián)免疫測定技術
一、基本原理
二、在固相包被免疫反應物
三、酶標記抗體的制備
四、 ELISA測定的一般方法
五、 應用實例
第4節(jié) 免疫沉淀技術
一、靶蛋白的放射性標記
二、裂解細胞
三、抗原-抗體復合物的形成及收集
第5節(jié) 放射免疫分析法
一、 基本原理
二、抗血清的制備
三、抗原的標記
四、操作步驟
第6節(jié) 免疫印跡技術
一、基本原理
二、組織和細胞的裂解
三、SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳
四、蛋白質的電轉移
五、固定于膜上的蛋白質染色
六、封閉硝酸纖維素膜
七、抗體與被測蛋白結合
八、酶聯(lián)抗體顯色
十一、 應用實例
第14章 腦神經(jīng)通路損毀模型及中樞給藥方法
第1節(jié) 中樞神經(jīng)通路損毀方法
一、電解損毀法
二、化學損毀法
三、手術損毀法
四、單個神經(jīng)元的殺傷技術
五、外周神經(jīng)的損傷
第2節(jié) 中樞給藥方法
一、小鼠腦室給藥法
二、大鼠側腦室給藥法
三、大鼠腦內神經(jīng)核團給藥法
四、腦室灌流法
五、一種體內持續(xù)給藥方法-微量透析泵
第15章 抗腦缺血藥理學
第１節(jié) 概述
第２節(jié)　腦缺血動物實驗模型
一、全腦缺血動物模型
二、局灶性腦缺血模型
三、缺血性腦損傷的評價方法
四、動物模型中缺血性腦損傷的影響因素
五、腦缺血體外模型
第３節(jié) 缺血性神經(jīng)細胞損傷的機制分析
一、線粒體功能的評價
二、自由基及氧化損傷
三、半胱氨酸蛋白酶活性分析
四、炎性細胞因子測定
第16章 學習、記憶的行為學研究方法
第1節(jié) 概述
第2節(jié) 條件反射法
一、跳臺法
二、避暗法
三、穿梭箱
四、迷津
五、八臂迷宮法
六、記憶障礙動物模型
七、操作式條件反射
八、用于觀察認知功能改善的老年癡呆或記憶障礙模型
第3節(jié) 海馬LTP的記錄方法
第4節(jié) LTP結合行為學實驗評價促智藥物
第17章 突觸可塑性電生理學
第1節(jié) 概述
第2節(jié) 突觸可塑性的分類
一、雙脈沖可塑性
二、強直后增強
三、LTP
四、LTD
五、突觸超可塑性
第3節(jié) 突觸可塑性實驗的相關術語和參數(shù)
一、誘發(fā)動作電位
二、測量峰點非固定波動分析
三、海馬回路
四、基礎水平線
五、輸入/輸出曲線
六、誘導突觸可塑性的參數(shù)
七、計算機數(shù)據(jù)采集分析系統(tǒng)
第4節(jié) 大鼠在體腦內記錄突觸可塑性的方法
一、儀器設備
二、實驗步驟
三、注意事項
第5節(jié) 腦片上記錄LTP的方法
一、儀器設備
二、實驗步驟
三、注意事項
四、常用網(wǎng)站
第18章 老年癡呆癥（AD）實驗模型及抗AD研究
第1節(jié) 概述
第2節(jié) AD動物模型
第3節(jié) APP轉基因模型
一、影響APP轉基因鼠模型的相關因素
二、APP轉基因鼠的神經(jīng)病變特征
第4節(jié) 體外培養(yǎng)神經(jīng)細胞A(損傷模型
一、神經(jīng)細胞培養(yǎng)
二、Aβ毒性模型建立
第5節(jié) (-淀粉樣蛋白剛果紅染色
一、染色原理
二、標本制備
三、實驗材料與試劑
四、染色過程
五、結果
第6節(jié) 損毀中樞膽堿能神經(jīng)元的AD動物模型
一、基本原理
二、操作步驟
三、觀測指標
四、注意事項
五、方法評價
第7節(jié) AD藥物治療的途徑和研究展望
第19章 帕金森病（PD）實驗模型及抗PD研究
第1節(jié) 概述
第2節(jié) 帕金森病動物模型
一、MPTP模型
二、6-羥基多巴胺（6-OHDA）模型
三、高鐵模型
四、機械損傷模型
五、利血平模型
六、L-DOPA 誘導的運動障礙動物模型
七、檳榔堿致小鼠震顫模型
八、氧化震顫素致小鼠震顫模型
九、毒扁豆堿致大鼠震顫模型
十、氟哌啶醇致小鼠僵住癥模型
十一、病毒感染模型
十二、方法評價
第3節(jié) 帕金森病體外細胞模型
一、細胞轉染的PD體外模型
二、藥物毒性作用誘導的PD體外模型
第4節(jié) 帕金森病動物模型的檢測方法
一、動物旋轉實驗
二、腦中單胺氧化酶（MAO-B）活性測定
三、腦中乙酰膽堿酯酶（Ach E）活性測定
四、腦區(qū)DA神經(jīng)元定性-TH染色
五、DA能神經(jīng)遞質釋放的測定-快速周期伏安法
六、腦內多巴胺及其代謝產(chǎn)物含量測定-高效液相色譜法
七、在體測定腦內DA含量變化-微透析法
八、DA受體測定
第5節(jié) 帕金森病的神經(jīng)干細胞（NSC）移植療法
一、NSC的來源
二、NSC的分離、培養(yǎng)與鑒別
三、NSC的增殖和分化
四、NSC移植
第20章 抗焦慮藥理學
第1節(jié) 概述
第2節(jié) 可供選擇的模型
一、非條件反射焦慮模型
二、條件反射焦慮模型
第21章 抗抑郁藥理學
第1節(jié) 基本原則
第2節(jié) 抑郁動物模型
一、應激模型
二、腦損傷模型-大鼠嗅球切除模型
三、操作行為模型-大鼠72秒低頻差式強化程序法
四、藥物相互作用模型
五、遺傳型抑郁動物模型
第22章 抗癲癇、抗驚厥藥理學
第1節(jié) 概述
第2節(jié) 體外實驗方法
一、[3H]-GABA受體結合實驗
二、GABAA受體結合實驗
三、GABAB 受體結合實驗
四、GABA攝取和釋放實驗
五、[3H]CPP谷氨酸受體結合實驗
六、NMDA受體復合物：[3H] TCP結合實驗
七、[35S]-TBPS與大鼠皮層勻漿及切片結合實驗
八、[3H]甘氨酸與大鼠大腦皮層結合試驗
九、[3H]士的寧敏感的甘氨酸受體
十、體外海馬切片
第3節(jié) 在體實驗方法
一、急性實驗性驚厥模型
二、慢性實驗性癲癇模型
三、原發(fā)性實驗性癲癇模型
第23章 鎮(zhèn)靜催眠藥理學
第1節(jié) 鎮(zhèn)靜作用
一、間斷性行為實驗觀察方法
二、開闊法實驗
三、孔板實驗
四、聯(lián)合開闊法實驗
五、遙測分析大鼠大腦EEG
第2節(jié) 催眠作用
一、體外實驗
二、體內實驗
第24章 鎮(zhèn)痛藥理學
第1節(jié) 概述
第2節(jié) 痛覺模型及測定
一、整體動物模型
二、受體水平評價阿片類化合物活性
三、離體器官實驗
第3節(jié) 痛覺電生理學
一、痛覺電生理研究的電刺激法
二、生物電信號記錄
三、電壓鉗和膜片鉗技術
四、腦電圖及肌電圖的方法
第4節(jié) 痛覺遞質與受體
一、痛覺遞質的測定
二、痛覺相關受體的研究
第25章 藥物依賴性
第1節(jié) 概述
第2節(jié) 鎮(zhèn)靜催眠依賴性實驗
一、小鼠實驗方法
二、大鼠實驗方法
三、恒河猴實驗方法
第3節(jié) 阿片類成癮藥物依賴性實驗
一、小鼠試驗模型
二、大鼠試驗模型
三、恒河猴試驗模型
四、離體回腸縱肌試驗模型
第26章 神經(jīng)藥理學研究常用藥品與試劑介紹
第1節(jié) 細胞凋亡
一、概述
二、凋亡研究用抗體
三、凋亡檢測試劑盒
四、凋亡檢測試劑
五、細胞凋亡酶類和蛋白質
六、 Caspase抑制劑
七、 Caspase底物
八、 PARP調節(jié)劑
第2節(jié) 神經(jīng)傳遞
一、神經(jīng)科學研究用抗體
二、神經(jīng)蛋白質
三、神經(jīng)遞質代謝
四、神經(jīng)肽類
五、神經(jīng)遞質
六、藥理學制劑
第3節(jié) 鈣信號系統(tǒng)
一、鈣通道調節(jié)劑
二、細胞內鈣調節(jié)劑
三、鈣通道抗體
四、鈣調素和其它鈣結合蛋白
五、鈣相關蛋白抗體
六、鈣調素拮抗劑
七、鈣探針
八、鈣絡合劑
第4節(jié) 一氧化氮與細胞應激
一、細胞應激
二、氧化氮代謝
三、蛋白小體
第5節(jié) 細胞因子、生長因子與激素
一、細胞因子、生長因子和激素概述
二、神經(jīng)生長因子概述
三、神經(jīng)生長因子試劑
四、神經(jīng)生長因子抗體
第6節(jié) 單價離子通道
一、單價離子通道概述
二、鉀通道概述
三、鉀通道試劑
四、鈉通道試劑
五、各種離子泵抑制劑
六、氯通道
七、離子通道抗體
八、離子載體
九、離子探針
第7節(jié) 受體
一、細胞因子、生長因子和激素受體
二、細胞因子、生長因子和激素受體抗體
三、神經(jīng)遞質受體
四、神經(jīng)遞質受體抗體
第8節(jié) G蛋白和環(huán)核苷酸
一、G蛋白功能
二、環(huán)核苷酸代謝
第9節(jié) 細胞信號傳導中的脂質
一、二酰基甘油
二、神經(jīng)節(jié)苷脂
三、肌醇磷酸
四、磷脂
五、磷脂代謝
六、神經(jīng)鞘脂類
七、鞘脂類代謝
八、其它生物活性脂質
九、脂質信號傳導抗體
第10節(jié) 信號傳導研究用品
一、分析性細胞學試劑盒及供應品
二、細胞生長和活力測試盒
三、連接物試劑盒
四、神經(jīng)元染料和示蹤劑
五、細胞溶解酶
六、洗滌劑
七、蛋白酶抑制劑
八、結合型試劑盒
九、緩沖液與試劑
第27章 圖像可視化技術在神經(jīng)藥理學研究中的應用
第1節(jié) 低分子熒光探針在觀察神經(jīng)功能活動的可視化應用
一、熒光的原理和熒光探針
二、熒光的檢測裝置
三、熒光可視化法在神經(jīng)藥理學的應用
第2節(jié) 熒光蛋白的特性及其在生命科學領域的應用
一、熒光蛋白的發(fā)現(xiàn)經(jīng)過及其應用
二、熒光蛋白的特殊性質
三、GFP嵌合蛋白（Chimera protein）的設計
第3節(jié) 熒光蛋白可視化技術在神經(jīng)藥理學研究中的應用
一、利用熒光蛋白可視化技術對神經(jīng)細胞內信號傳導通路的解析
二、利用熒光蛋白可視化技術對神經(jīng)細胞內重要蛋白的觀察解析
三、細胞內功能蛋白的存在部位和動態(tài)的解析
附 錄
附錄1 神經(jīng)藥理學研究參考書簡介
附錄2 神經(jīng)科學及藥理學期刊簡況
索 引
中文索引
英文索引