細(xì)胞工程

第一篇 細(xì)胞培養(yǎng)基本技術(shù)
　第一章 細(xì)胞培養(yǎng)的基本知識(shí)
　　第一節(jié) 基本概念和名詞
　　第二節(jié) 細(xì)胞的特性
　　　一、培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)與結(jié)構(gòu)
　　　二、培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)方式和類型
　　　三、培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)特點(diǎn)和生長(zhǎng)增殖過(guò)程
　第二章 細(xì)胞培養(yǎng)的條件
　　第一節(jié) 細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)
　　　一、水
　　　二、糖
　　　三、氨基酸
　　　四、維生素
　　　五、無(wú)機(jī)離子和微量元素
　　　六、血清
　　　七、促細(xì)胞生長(zhǎng)因子
　　第二節(jié) 影響細(xì)胞生長(zhǎng)的因素
　　　一、溫度
　　　二、滲透壓
　　　三、氣體環(huán)境和pH值
　　　四、無(wú)毒和無(wú)菌
　　　五、輻射線和超聲波
　　　六、細(xì)胞接種密度
　　　七、容器轉(zhuǎn)動(dòng)速度和懸浮攪動(dòng)速度
　第三章 細(xì)胞培養(yǎng)的必備設(shè)施、常用器材和培養(yǎng)基
　　第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的必備設(shè)施
　　　一、無(wú)菌實(shí)驗(yàn)室
　　　二、超凈工作臺(tái)
　　　三、恒溫培養(yǎng)箱
　　　四、其他設(shè)備
　　第二節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)常用器材及處理方法
　　　一、玻璃器材
　　　二、塑料器材
　　　三、橡膠器材
　　　四、金屬器材
　　　五、其他用品
　　第三節(jié) 常用溶液、培養(yǎng)基及其配制
　　　一、平衡鹽溶液
　　　二、其他溶液
　　　三、培養(yǎng)基
　第四章 原代細(xì)胞的培養(yǎng)與建系
　　第一節(jié) 原代細(xì)胞的取材
　　　一、取材的基本要求
　　　二、各類組織的取材技術(shù)
　　第二節(jié) 原代細(xì)胞的分離和制作
　　　一、懸浮細(xì)胞的分離方法
　　　二、實(shí)體組織材料的分離方法
　　　三、原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法
　　第三節(jié) 原代和傳代細(xì)胞的培養(yǎng)和維持
　　　一、原代細(xì)胞的培養(yǎng)與維持
　　　二、原代細(xì)胞培養(yǎng)的首次傳代
　　　三、傳代細(xì)胞的傳代培養(yǎng)
　　　四、傳代細(xì)胞的建系和維持
　　第四節(jié) 原代細(xì)胞的純化和克隆
　　　一、細(xì)胞的純化
　　　二、細(xì)胞的克隆
　第五章 正常細(xì)胞的培養(yǎng)
　　第一節(jié) 上皮細(xì)胞的培養(yǎng)
　　　一、表皮細(xì)胞分離培養(yǎng)
　　　二、乳腺上皮細(xì)胞分離培養(yǎng)
　　　三、子宮頸上皮細(xì)胞分離培養(yǎng)
　　　四、肝細(xì)胞分離培養(yǎng)
　　　五、胰腺細(xì)胞分離培養(yǎng)
　　　六、氣管及支氣管上皮細(xì)胞分離培養(yǎng)
　　　七、前列腺細(xì)胞培養(yǎng)
　　　八、口腔黏膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)
　　　九、胃上皮細(xì)胞培養(yǎng)
　　第二節(jié) 中胚層細(xì)胞培養(yǎng)
　　　一、結(jié)締組織細(xì)胞培養(yǎng)
　　　二、肌肉組織細(xì)胞培養(yǎng)
　　　三、各種骨細(xì)胞分離培養(yǎng)
　　　四、骨髓細(xì)胞分離培養(yǎng)
　　　五、內(nèi)皮細(xì)胞分離培養(yǎng)
　　　六、血細(xì)胞分離培養(yǎng)
　　第三節(jié) 神經(jīng)外胚層細(xì)胞培養(yǎng)
　　　一、神經(jīng)細(xì)胞分離培養(yǎng)
　　　二、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞分離培養(yǎng)
　　第四節(jié) 眼細(xì)胞培養(yǎng)
　　　一、概述
　　　二、眼細(xì)胞培養(yǎng)類型及方法
　第六章 干細(xì)胞的培養(yǎng)
　　第一節(jié) 干細(xì)胞的概念和來(lái)源
　　　一、干細(xì)胞的概念
　　　二、干細(xì)胞的來(lái)源
　　第二節(jié) 胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)
　　　一、胚胎干細(xì)胞的特性和分化潛能
　　　二、胚胎干細(xì)胞的建系
　　　三、胚胎干細(xì)胞的培養(yǎng)
　　第三節(jié) 造血干/祖細(xì)胞培養(yǎng)
　　　一、造血干/祖細(xì)胞的生物學(xué)特性及研究方法
　　　二、造血祖細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)
　　　三、造血干/祖細(xì)胞的分離純化
　　　四、造血干/祖細(xì)胞的體外擴(kuò)增
　　　五、造血干/祖細(xì)胞體外擴(kuò)增的臨床應(yīng)用
　　第四節(jié) 神經(jīng)干細(xì)胞的分離和培養(yǎng)
　　　一、神經(jīng)干細(xì)胞生物學(xué)特性
　　　二、影響神經(jīng)干細(xì)胞分化的因素
　　　三、神經(jīng)干細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)
　　　四、神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)的意義及應(yīng)用
　第七章 昆蟲(chóng)、魚(yú)及其他動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)
　　第一節(jié) 昆蟲(chóng)細(xì)胞的培養(yǎng)
　　　一、鱗翅目昆蟲(chóng)細(xì)胞原代培養(yǎng)的基本方法
　　　二、鱗翅目昆蟲(chóng)細(xì)胞系的建立
　　　三、昆蟲(chóng)缺陷型細(xì)胞株的建立
　　第二節(jié) 魚(yú)類細(xì)胞培養(yǎng)
　　　一、魚(yú)類組織細(xì)胞培養(yǎng)
　　　二、魚(yú)類血細(xì)胞培養(yǎng)方法
　　第三節(jié) 中華鱉胚胎細(xì)胞培養(yǎng)
　　　一、中華鱉胚胎細(xì)胞的原代培養(yǎng)
　　　二、中華鱉胚胎細(xì)胞的傳代培養(yǎng)
　　　三、中華鱉胚胎細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)注意的問(wèn)題
　第八章 腫瘤細(xì)胞的誘導(dǎo)分化和培養(yǎng)
　　第一節(jié) 腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)
　　　一、腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)特性
　　　二、腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)特性的檢測(cè)
　　　三、腫瘤細(xì)胞的取材和培養(yǎng)
　　第二節(jié) 腫瘤細(xì)胞的誘導(dǎo)分化
　　　一、白血病細(xì)胞的誘導(dǎo)分化
　　　二、實(shí)體瘤細(xì)胞的誘導(dǎo)分化
　　　三、腫瘤細(xì)胞體內(nèi)分化誘導(dǎo)實(shí)例
　第九章 細(xì)胞培養(yǎng)的污染及控制
　　第一節(jié) 污染的類型
　　　一、細(xì)菌污染
　　　二、真菌污染
　　　三、支原體污染
　　　四、病毒污染
　　　五、其他污染
　　第二節(jié) 污染來(lái)源及鑒別
　　　一、污染來(lái)源
　　　二、污染的鑒別
　　第三節(jié) 污染的清除和預(yù)防
　　　一、污染的清除
　　　二、污染的預(yù)防
　第十章 細(xì)胞的冷凍保存復(fù)蘇技術(shù)
　　第一節(jié) 細(xì)胞的凍存
　　　一、概述
　　　二、主要冷凍設(shè)備和材料
　　　三、細(xì)胞凍存方法
　　第二節(jié) 細(xì)胞的復(fù)蘇
　　　一、細(xì)胞復(fù)蘇的原則
　　　二、細(xì)胞復(fù)蘇的主要操作步驟
　　　三、復(fù)蘇時(shí)的注意事項(xiàng)
　　第三節(jié) 細(xì)胞的運(yùn)輸
　　　一、冷凍儲(chǔ)存運(yùn)輸
　　　二、充液法
　第十一章 培養(yǎng)細(xì)胞觀察與檢測(cè)方法
　　第一節(jié) 培養(yǎng)細(xì)胞的常規(guī)檢查和觀察方法
　　　一、肉眼觀察
　　　二、顯微鏡觀察
　　　三、細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)的觀察
　　　四、微生物污染的觀察
　　第二節(jié) 培養(yǎng)活細(xì)胞的觀察方法
　　　一、相差顯微鏡直接觀察法
　　　二、暗視野顯微鏡觀察活細(xì)胞
　　　三、縮時(shí)顯微攝影觀察
　　　四、離體活細(xì)胞染色觀察
　　第三節(jié) 細(xì)胞固定觀察法
　　　一、細(xì)胞固定基本方法
　　　二、常用染色方法
　　　三、特殊染色方法
　　第四節(jié) 細(xì)胞生長(zhǎng)狀況有關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)方法
　　　一、細(xì)胞計(jì)數(shù)
　　　二、細(xì)胞生長(zhǎng)曲線和生長(zhǎng)倍數(shù)
　　　三、細(xì)胞分裂指數(shù)
　　　四、細(xì)胞接種存活率
　　　五、克隆形成率
　　第五節(jié) 細(xì)胞生物活性的化學(xué)檢測(cè)法
　　　一、四唑鹽（MTT）比色法
　　　二、細(xì)胞蛋白質(zhì)含量測(cè)定法（考馬斯亮藍(lán)測(cè)定法）
　　　三、細(xì)胞蛋白質(zhì)合成測(cè)定法（H亮氨酸摻入法）
　　　四、細(xì)胞DNA合成測(cè)定法
　　第六節(jié) 電子顯微鏡觀察法
　　　一、透射電子顯微鏡細(xì)胞樣品制備技術(shù)和觀察方法
　　　二、掃描電子顯微鏡細(xì)胞樣品制備
　　第七節(jié) 激光掃描共聚焦顯微鏡觀察法
　　　一、激光掃描共聚焦顯微鏡基本結(jié)構(gòu)
　　　二、激光掃描共聚焦顯微鏡使用步驟
　　　三、激光掃描共聚焦顯微鏡功能
第二篇 細(xì)胞工程常用專門技術(shù)
　第十二章 細(xì)胞染色體檢測(cè)和熒光原位雜交技術(shù)
　　第一節(jié) 性染色質(zhì)檢測(cè)
　　　一、X染色質(zhì)顯示法
　　　二、Y染色質(zhì)顯示法
　　第二節(jié) 培養(yǎng)細(xì)胞染色體顯示方法
　　　一、原理
　　　二、傳代細(xì)胞染色體檢測(cè)
　　　三、微量外周血白細(xì)胞染色體檢查
　　　四、羊水細(xì)胞培養(yǎng)
　　第三節(jié) 染色體結(jié)構(gòu)顯示和檢測(cè)
　　　一、染色體顯帶原理和種類
　　　二、染色體顯帶方法要點(diǎn)
　　　三、常用染色體顯帶法
　　　四、姐妹染色單體分化染色
　　第四節(jié) 熒光原位雜交技術(shù)
　　　一、探針的類型和制備
　　　二、熒光素標(biāo)記原位雜交的方法
　　　三、熒光原位雜交的基本步驟
　　　四、染色體熒光原位雜交基本步驟
　　　五、影響熒光原位雜交實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素
　　　六、熒光原位雜交技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)和存在的主要問(wèn)題
　第十三章 體外培養(yǎng)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)化灶的分離培養(yǎng)
　　第一節(jié) 細(xì)胞轉(zhuǎn)化的概念、方式和過(guò)程
　　　一、細(xì)胞轉(zhuǎn)化與惡變的區(qū)別
　　　二、細(xì)胞轉(zhuǎn)化的方式
　　　三、細(xì)胞轉(zhuǎn)化的基本過(guò)程
　　第二節(jié) 轉(zhuǎn)化細(xì)胞的誘變因素及選擇
　　　一、誘變劑的選擇
　　　二、轉(zhuǎn)化細(xì)胞的選擇和常用的細(xì)胞種類
　　第三節(jié) 細(xì)胞轉(zhuǎn)化方法和轉(zhuǎn)化灶的分離純化
　　　一、細(xì)胞轉(zhuǎn)化方法
　　　二、轉(zhuǎn)化灶的分離
　　　三、轉(zhuǎn)化細(xì)胞的篩選
　　第四節(jié) 幾種常用細(xì)胞轉(zhuǎn)化技術(shù)實(shí)例
　　　一、化學(xué)致癌物轉(zhuǎn)化細(xì)胞
　　　二、病毒轉(zhuǎn)化細(xì)胞
　第十四章 DNA損傷和細(xì)胞凋亡檢測(cè)技術(shù)
　　第一節(jié) DNA損傷檢測(cè)技術(shù)
　　　一、DNA片段分析——DNA梯形條帶分析
　　　二、DNA斷裂檢測(cè)
　　第二節(jié) 細(xì)胞凋亡及其檢測(cè)技術(shù)
　　　一、細(xì)胞凋亡的特征
　　　二、細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制
　　　三、細(xì)胞凋亡的醫(yī)學(xué)意義
　　　四、細(xì)胞凋亡試驗(yàn)常用的方法
　　　五、bcl凋亡基因表達(dá)的檢測(cè)
　　　六、JAM檢測(cè)技術(shù)
　第十五章 細(xì)胞融合、單克隆抗體的雜交瘤技術(shù)和生產(chǎn)技術(shù)
　　第一節(jié) 細(xì)胞融合
　　　一、常用細(xì)胞融合劑
　　　二、細(xì)胞融合方式
　　第二節(jié) 單克隆抗體的雜交瘤技術(shù)
　　　一、單克隆抗體技術(shù)基本原理
　　　二、單克隆抗體技術(shù)的特點(diǎn)
　　　三、單克隆抗體技術(shù)的應(yīng)用
　　　四、雜交瘤細(xì)胞制備的操作程序
　　第三節(jié) 單克隆抗體生產(chǎn)技術(shù)
　　　一、牛淋巴液體外循環(huán)培養(yǎng)法
　　　二、微囊培養(yǎng)法（microencapsu lation）
　　　三、含血清的雜交瘤細(xì)胞大量培養(yǎng)法
　　　四、無(wú)血清的雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)法
　　　五、工業(yè)化懸浮培養(yǎng)生產(chǎn)單克隆抗體的工藝流程
　第十六章 細(xì)胞毒試驗(yàn)技術(shù)和藥物敏感試驗(yàn)的細(xì)胞培養(yǎng)法
　　第一節(jié) 癌細(xì)胞的殺傷研究
　　　一、癌細(xì)胞殺傷研究的種類
　　　二、細(xì)胞毒試驗(yàn)
　　第二節(jié) 藥物敏感試驗(yàn)的細(xì)胞培養(yǎng)法
　　　一、細(xì)胞培養(yǎng)在藥物敏感試驗(yàn)中的作用
　　　二、藥物敏感試驗(yàn)方法
　　　三、不同抗癌藥物的生物效應(yīng)指標(biāo)的選擇
　第十七章 病毒研究中應(yīng)用的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)和疫苗生產(chǎn)技術(shù)
　　第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)用于病毒研究的優(yōu)點(diǎn)
　　第二節(jié) 用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)分離病毒
　　　一、接種標(biāo)本的處理
　　　二、病毒的細(xì)胞培養(yǎng)
　　　三、在細(xì)胞培養(yǎng)中病毒作用之識(shí)別
　　　四、在單層細(xì)胞上滴定病毒
　　第三節(jié) 病毒的鑒定技術(shù)
　　　一、病毒蝕斑技術(shù)
　　　二、病毒蝕斑抑制試驗(yàn)
　　　三、細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)中的中和試驗(yàn)
　　　四、用細(xì)胞培養(yǎng)法制備病毒血清學(xué)抗原應(yīng)注意的問(wèn)題
　　第四節(jié) 病毒和疫苗的生產(chǎn)制備技術(shù)
　　　一、病毒的生產(chǎn)制備
　　　二、病毒疫苗的生產(chǎn)制備
　第十八章 細(xì)胞因子
　　第一節(jié) 細(xì)胞因子概況
　　　一、細(xì)胞因子研究概況
　　　二、細(xì)胞因子的特點(diǎn)
　　　三、各類細(xì)胞因子特性和功能
　　　四、細(xì)胞因子的醫(yī)學(xué)意義及其應(yīng)用
　　第二節(jié) 細(xì)胞因子的誘導(dǎo)表達(dá)
　　　一、白細(xì)胞介素類的誘生
　　　二、集落刺激因子類的誘生
　　　三、腫瘤壞死因子的誘生
　　　四、干擾素的誘生和制備
　　第三節(jié) 細(xì)胞因子的效價(jià)測(cè)定
　　　一、細(xì)胞因子效價(jià)測(cè)定的原理
　　　二、細(xì)胞因子效價(jià)測(cè)定方法
　第十九章 細(xì)胞基因分離鑒定和原位雜交
　　第一節(jié) 細(xì)胞DNA、RNA的分離鑒定技術(shù)
　　　一、培養(yǎng)細(xì)胞基因組DNA的提取及鑒定
　　　二、培養(yǎng)細(xì)胞總RNA的提取及鑒定
　　第二節(jié) 核酸、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移電泳及雜交
　　　一、DNA Southern Blot及雜交
　　　二、RNA Northern Blot及雜交
　　　三、蛋白質(zhì)Western Blot及分析
　　第三節(jié) 熒光定量PCR技術(shù)
　　　一、主要應(yīng)用技術(shù)原理和特點(diǎn)
　　　二、實(shí)驗(yàn)儀器
　　　三、熒光定量的主要應(yīng)用領(lǐng)域
　　第四節(jié) 細(xì)胞的原位雜交技術(shù)
　　　一、探針的制備原則和選擇
　　　二、載玻片和蓋玻片的預(yù)處理
　　　三、組織細(xì)胞固定
　　　四、原位雜交
　第二十章 基因細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)導(dǎo)技術(shù)
　　　一、基本概念
　　　二、物理、化學(xué)法基因轉(zhuǎn)染技術(shù)
　　　三、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體介導(dǎo)DNA轉(zhuǎn)染
　　　四、轉(zhuǎn)染細(xì)胞鑒定
　第二十一章 流式細(xì)胞儀技術(shù)
　　　一、樣品的制備
　　　二、懸浮細(xì)胞的固定
　　　三、流式細(xì)胞儀分析的應(yīng)用
第三篇 細(xì)胞工程生產(chǎn)應(yīng)用技術(shù)
　第二十二章 大規(guī)模生產(chǎn)細(xì)胞技術(shù)
　　第一節(jié) 培養(yǎng)要素控制及其參數(shù)的測(cè)定
　　　一、細(xì)胞的定量測(cè)定
　　　二、培養(yǎng)要素控制
　　第二節(jié) 大規(guī)模培養(yǎng)系統(tǒng)應(yīng)采取的措施
　　第三節(jié) 大規(guī)模生產(chǎn)細(xì)胞的方法
　　　一、單層靜置貼壁培養(yǎng)法
　　　二、固定化培養(yǎng)法
　　　三、懸浮培養(yǎng)
　第二十三章 細(xì)胞工程的應(yīng)用
　　第一節(jié) 在細(xì)胞生物學(xué)、組織胚胎學(xué)和藥學(xué)方面的應(yīng)用
　　　一、在細(xì)胞生物學(xué)方面的應(yīng)用
　　　二、在組織胚胎學(xué)方面的應(yīng)用
　　　三、在藥物學(xué)和藥理學(xué)方面的應(yīng)用
　　第二節(jié) 在腫瘤研究方面的應(yīng)用
　　　一、腫瘤病因和發(fā)病機(jī)制的研究
　　　二、抗癌藥物篩選方面的研究
　　　三、癌基因和抑癌基因方面的研究
　　　四、癌細(xì)胞的誘導(dǎo)分化和逆轉(zhuǎn)方面的研究
　　　五、癌細(xì)胞的殺傷效應(yīng)的研究
　　第三節(jié) 在免疫學(xué)中的應(yīng)用
　　　一、免疫細(xì)胞表面標(biāo)記和功能的常規(guī)檢測(cè)
　　　二、白細(xì)胞分化抗原的分類和主要特征
　　　三、單核吞噬細(xì)胞的培養(yǎng)和功能的測(cè)定
　　　四、免疫細(xì)胞毒試驗(yàn)
　　　五、在HLA抗原檢測(cè)中的應(yīng)用
　　　六、在器官和組織移植免疫中的應(yīng)用
　　第四節(jié) 在臨床各科中的應(yīng)用
　　　一、在外科的應(yīng)用
　　　二、在內(nèi)科的應(yīng)用
　　　三、在婦產(chǎn)科的應(yīng)用
附錄
　附錄1 人和動(dòng)物的主要細(xì)胞系（株）
　附錄2 離心速度和離心力換算表
　附錄3 常用人工合成細(xì)胞培養(yǎng)基
　附錄4 細(xì)胞培養(yǎng)常用名詞解釋
　附錄5 細(xì)胞培養(yǎng)常用的溶液
　附錄6 中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心細(xì)胞庫(kù)可供細(xì)胞目錄
　附錄7 中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞生物學(xué)研究所細(xì)胞庫(kù)可供細(xì)胞目錄
參考文獻(xiàn)