蘇云金芽孢桿菌Cry1類(lèi)毒素免疫廣譜檢測(cè)技術(shù)研究

　　采用正負(fù)篩選方法，成功獲得六株具有Cry1Ab毒素蛋白結(jié)合活性的陽(yáng)性噬菌體單域抗體菌株，利用基因工程抗體易于定向修飾及Cry毒素具有相似結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)，以Cry1Ab毒素單域抗體基因?yàn)椴牧希ㄟ^(guò)同源建模及分子對(duì)接技術(shù)分析了Cry1Ab抗體與五種Cry1類(lèi)毒素的關(guān)鍵氨基酸結(jié)合位點(diǎn)，以關(guān)鍵結(jié)合位點(diǎn)及其鄰近位點(diǎn)為目標(biāo)，利用SPDBV軟件進(jìn)行虛擬協(xié)同突變，預(yù)測(cè)親和力及廣譜性都有所提高的突變抗體并通過(guò)定點(diǎn)飽和突變技術(shù)定向改造母本抗體構(gòu)建突變抗體庫(kù)；克隆表達(dá)了Cry1類(lèi)毒素共性結(jié)構(gòu)域并利用共性結(jié)構(gòu)域蛋白包被和多種Cry1類(lèi)毒素交替包被篩選策略，獲取了五個(gè)檢測(cè)對(duì)象可覆蓋多種Cry1類(lèi)毒素的廣譜抗體，比較分析突變抗體和母本抗體的親和力及廣譜性，探索廣譜抗體識(shí)別區(qū)的分子結(jié)構(gòu)特性，為建立高靈敏度多種Bt Cry毒素的免疫篩查方法和開(kāi)發(fā)Cry毒素高效檢測(cè)技術(shù)奠定基礎(chǔ)。

　　焦凌霞，女，博士，副教授，河南農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士生導(dǎo)師，河南省教育廳學(xué)術(shù)技術(shù)帶頭人。主要從事食品生物技術(shù)的教學(xué)科研工作，主持和參加省部級(jí)以上項(xiàng)目10余項(xiàng)，發(fā)表SCI論文10余篇。