生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)（第六版）

目錄
第六版前言
第五版前言
第一章 糖類 1
實(shí)驗(yàn)1 糖的顏色反應(yīng) 1
實(shí)驗(yàn)1.1 莫氏實(shí)驗(yàn) 1
實(shí)驗(yàn)1.2 塞氏實(shí)驗(yàn) 2
實(shí)驗(yàn)1.3 杜氏實(shí)驗(yàn) 4
實(shí)驗(yàn)2 糖的還原作用 5
實(shí)驗(yàn)3 糖的旋光性和變旋現(xiàn)象 6
實(shí)驗(yàn)4 血糖的定量測定（Folin-Wu法） 9
實(shí)驗(yàn)5 血糖的定量測定（葡萄糖氧化酶法） 11
實(shí)驗(yàn)6 血液中葡萄糖的測定（鄰甲苯胺法） 13
實(shí)驗(yàn)7 植物組織中可溶性總糖的測定（蒽酮比色法） 15
實(shí)驗(yàn)8 總糖和還原糖的測定（3， 5-二硝基水楊酸法） 18
實(shí)驗(yàn)9 淀粉的制備與水解 20
實(shí)驗(yàn)10 淀粉的分離純化及其組分含量的測定 22
實(shí)驗(yàn)11 果膠的提取與果膠含量的測定 25
第二章 脂質(zhì) 29
實(shí)驗(yàn)12 脂肪的組成 29
實(shí)驗(yàn)13 卵磷脂的提取和鑒定 31
實(shí)驗(yàn)14 粗脂肪含量的測定（Soxhlet抽提法） 32
實(shí)驗(yàn)15 碘價(jià)的測定（Hanus法） 35
實(shí)驗(yàn)16 皂化價(jià)的測定 37
實(shí)驗(yàn)17 脂肪酸價(jià)的測定 39
實(shí)驗(yàn)18 脂肪乙酰價(jià)的測定 40
實(shí)驗(yàn)19 血清膽固醇的定量測定（磷硫鐵法） 42
實(shí)驗(yàn)20 血清總膽固醇的測定（鄰苯二甲醛法） 43
實(shí)驗(yàn)21 血清膽固醇的定量測定（乙酸酐法） 45
實(shí)驗(yàn)22 血清甘油三酯簡易測定法 47
實(shí)驗(yàn)23 血清甘油三酯的測定（GPO-PAP法） 49
實(shí)驗(yàn)24 丙二醛（MDA）的測定 51
第三章 蛋白質(zhì) 55
實(shí)驗(yàn)25 蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng) 55
實(shí)驗(yàn)26 蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng) 58
實(shí)驗(yàn)27 蛋白質(zhì)濃度測定（微量凱氏定氮法） 60
實(shí)驗(yàn)28 蛋白質(zhì)濃度測定（雙縮脲法） 63
實(shí)驗(yàn)29 蛋白質(zhì)濃度測定（Folin-酚試劑法） 65
實(shí)驗(yàn)30 蛋白質(zhì)濃度測定（紫外光吸收法） 66
實(shí)驗(yàn)31 蛋白質(zhì)濃度測定（考馬斯亮藍(lán)結(jié)合法） 68
實(shí)驗(yàn)32 非蛋白氮（NPN）的測定 70
實(shí)驗(yàn)33 甲醛滴定法 72
實(shí)驗(yàn)34 DNP-氨基酸的制備和鑒定 73
實(shí)驗(yàn)35 DNS-氨基酸的制備和鑒定 76
實(shí)驗(yàn)36 用DNS法鑒定蛋白質(zhì)或多肽的N-端氨基酸 79
實(shí)驗(yàn)37 用DNS法測定多肽的氨基酸組成 82
實(shí)驗(yàn)38 肽的序列分析（PTH法） 84
實(shí)驗(yàn)39 尿素對(duì)蛋白質(zhì)的變性作用 86
實(shí)驗(yàn)40 氨基酸紙層析法 88
實(shí)驗(yàn)41 氨基酸微晶纖維素薄板層析法 91
實(shí)驗(yàn)42 離子交換柱層析法分離氨基酸 93
實(shí)驗(yàn)43 血清白蛋白的分離與純化 95
實(shí)驗(yàn)44 凝膠層析法分離純化蛋白質(zhì) 97
實(shí)驗(yàn)45 DEAE-Sephadex A-25分離純化多肽 100
實(shí)驗(yàn)46 親和層析法分離純化單克隆抗體 102
實(shí)驗(yàn)47 醋酸纖維薄膜電泳法分離血清蛋白質(zhì) 103
實(shí)驗(yàn)48 血清糖蛋白醋酸纖維薄膜電泳 106
實(shí)驗(yàn)49 牛乳中酪蛋白和乳糖的制備與鑒定 109
實(shí)驗(yàn)50 聚丙烯酰胺凝膠圓盤電泳法分離血清蛋白質(zhì) 111
實(shí)驗(yàn)51 聚丙烯酰胺凝膠垂直平板電泳法鑒定胰島素 114
實(shí)驗(yàn)52 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法測定蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量 117
實(shí)驗(yàn)53 用等電聚焦電泳法測定蛋白質(zhì)等電點(diǎn) 120
實(shí)驗(yàn)54 對(duì)流免疫電泳法測定胎兒甲種蛋白質(zhì) 122
實(shí)驗(yàn)55 火箭免疫電泳法 124
實(shí)驗(yàn)56 Western 印跡 126
實(shí)驗(yàn)57 酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA） 128
第四章 核酸 131
實(shí)驗(yàn)58 核酸的定量測定（定磷法） 131
實(shí)驗(yàn)59 酵母RNA的提取 133
實(shí)驗(yàn)60 RNA的定量測定（苔黑酚法） 135
實(shí)驗(yàn)61 動(dòng)物肝臟中DNA的提取 136
實(shí)驗(yàn)62 DNA的定量測定（二苯胺法） 138
實(shí)驗(yàn)63 5′-核苷酸的定量測定（過碘酸氧化法） 139
實(shí)驗(yàn)64 DEAE-纖維素薄板層析法測定核苷酸 142
實(shí)驗(yàn)65 核酸的酶法降解以及葡聚糖凝膠層析法制備5′-單核苷酸 144
實(shí)驗(yàn)66 質(zhì)粒DNA的提取 145
實(shí)驗(yàn)67 DNA瓊脂糖凝膠電泳 147
第五章 酶 151
實(shí)驗(yàn)68 影響酶促反應(yīng)的因素——溫度、pH、激活劑及抑制劑 151
實(shí)驗(yàn)69 胰蛋白酶米氏常數(shù)的測定 154
實(shí)驗(yàn)70 膽堿酯酶米氏常數(shù)的測定 157
實(shí)驗(yàn)71 過氧化氫酶米氏常數(shù)的測定 159
實(shí)驗(yàn)72 用正交法測定幾種因素對(duì)酶活力的影響 161
實(shí)驗(yàn)73 胰蛋白酶抑制劑苯甲基磺酰氯對(duì)胰蛋白酶的抑制作用 164
實(shí)驗(yàn)74 溶菌酶的提純結(jié)晶和活力測定 166
實(shí)驗(yàn)75 豬胰糜蛋白酶的制備和純度鑒定 168
實(shí)驗(yàn)76 大腸桿菌堿性磷酸酶的制備 170
實(shí)驗(yàn)77 堿性磷酸酶的提取和分離及比活力測定 173
實(shí)驗(yàn)78 大蒜細(xì)胞SOD的提取和分離及活力測定 177
實(shí)驗(yàn)79 瓊脂糖凝膠電泳法分離乳酸脫氫酶同工酶 180
實(shí)驗(yàn)80 聚丙烯酰胺凝膠電泳法分離乳酸脫氫酶同工酶 182
實(shí)驗(yàn)81 肝臟谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力測定 184
實(shí)驗(yàn)82 血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力測定 187
第六章 維生素 190
實(shí)驗(yàn)83 維生素A的定性測定 190
實(shí)驗(yàn)84 維生素B1的定性測定 191
實(shí)驗(yàn)85 維生素C的定量測定（2， 6-二氯酚靛酚滴定法） 192
實(shí)驗(yàn)86 維生素C的定量測定（磷鉬酸法） 195
實(shí)驗(yàn)87 核黃素（維生素B2）熒光光度定量測定法 197
實(shí)驗(yàn)88 胡蘿卜素的定量測定 199
實(shí)驗(yàn)89 熒光法測定核黃素結(jié)合蛋白-核黃素的解離常數(shù) 201
第七章 激素 204
實(shí)驗(yàn)90 甲狀腺素的測定 204
實(shí)驗(yàn)91 雌二醇的測定 206
第八章 物質(zhì)代謝與生物氧化 208
實(shí)驗(yàn)92 肌糖原的酵解作用 208
實(shí)驗(yàn)93 脂肪酸的β-氧化 210
實(shí)驗(yàn)94 發(fā)酵過程中無機(jī)磷的被利用和ATP的生成（ATP的生物合成） 213
第九章 綜合實(shí)驗(yàn) 215
實(shí)驗(yàn)95 肝素鈉的分離提純及含量測定 215
實(shí)驗(yàn)95.1 肝素鈉粗制品的制備之（Ⅰ）——鹽解法 215
實(shí)驗(yàn)95.2 肝素鈉粗制品的制備之（Ⅱ）——酶解法 217
實(shí)驗(yàn)95.3 肝素鈉粗制品的純化 220
實(shí)驗(yàn)95.4 肝素鈉的生物測定法 222
實(shí)驗(yàn)95.5 肝素鈉的定量測定 225
實(shí)驗(yàn)96 用高效液相層析（HPLC）定量測定胰島素中的氨基酸 227
實(shí)驗(yàn)96.1 胰島素的酸水解 227
實(shí)驗(yàn)96.2 用HPLC 定量測定胰島素水解產(chǎn)物中的氨基酸 228
實(shí)驗(yàn)97 維生素C 對(duì)過氧化氫（H2O2）誘導(dǎo)的小鼠巨噬細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用 231
實(shí)驗(yàn)97.1 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的收集與培養(yǎng) 231
實(shí)驗(yàn)97.2 MTT法測定巨噬細(xì)胞死亡率 232
實(shí)驗(yàn)97.3 活性氧檢測試劑盒探測細(xì)胞內(nèi)活性氧的水平 234
實(shí)驗(yàn)97.4 NO和NO合成酶活性的測定 235
實(shí)驗(yàn)98 酵母醇脫氫酶的提純及其性質(zhì)的研究 237
實(shí)驗(yàn)98.1 酵母醇脫氫酶的提純 237
實(shí)驗(yàn)98.2 酵母醇脫氫酶的凝膠層析 240
實(shí)驗(yàn)98.3 酵母醇脫氫酶的專一性 241
實(shí)驗(yàn)98.4 酵母醇脫氫酶的動(dòng)力學(xué)研究 243
實(shí)驗(yàn)99 α-淀粉酶的分離純化、鑒定和Km、Vmax的測定 249
實(shí)驗(yàn)99.1 α-淀粉酶的活力測定 249
實(shí)驗(yàn)99.2 α-淀粉酶的疏水層析 252
實(shí)驗(yàn)99.3 α-淀粉酶的離子交換柱層析 254
實(shí)驗(yàn)99.4 聚丙烯酰胺凝膠垂直平板電泳法鑒定α-淀粉酶 255
實(shí)驗(yàn)99.5 米氏常數(shù)（Km）和最大反應(yīng)速率（Vmax）的測定 257
實(shí)驗(yàn)100 螺旋藻藻藍(lán)蛋白的分離、純化與鑒定 260
實(shí)驗(yàn)100.1 螺旋藻粗藻藍(lán)蛋白的制備 260
實(shí)驗(yàn)100.2 離子交換柱層析法分離藻藍(lán)蛋白 261
實(shí)驗(yàn)101 原花色素的提取、純化與測定 262
實(shí)驗(yàn)101.1 山楂原花色素的提取 263
實(shí)驗(yàn)101.2 原花色素的測定（Ⅰ） 264
實(shí)驗(yàn)101.3 原花色素的測定（Ⅱ） 266
實(shí)驗(yàn)102 熊果酸的制備和測定 267
實(shí)驗(yàn)102.1 山楂熊果酸的制備 268
實(shí)驗(yàn)102.2 熊果酸含量測定 268
實(shí)驗(yàn)103 鎳化合物誘導(dǎo)人Jurkat 細(xì)胞凋亡途徑的研究 270
實(shí)驗(yàn)103.1 Jurkat 細(xì)胞的培養(yǎng) 270
實(shí)驗(yàn)103.2 Annexin V-FITC/PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡 272
實(shí)驗(yàn)103.3 RT-PCR檢測凋亡相關(guān)基因bcl-2的表達(dá) 274
實(shí)驗(yàn)103.4 酶聯(lián)免疫吸附檢測Bcl-2蛋白表達(dá)水平 276
實(shí)驗(yàn)104 cDNA的制備與鑒定 278
實(shí)驗(yàn)104.1 從HepG2細(xì)胞中提取總RNA 278
實(shí)驗(yàn)104.2 逆轉(zhuǎn)錄獲得人HepG2細(xì)胞的cDNA 280
實(shí)驗(yàn)104.3 cDNA中肝癌相關(guān)基因AFP的鑒定 282
第十章 臨床生化指標(biāo)的自動(dòng)測定 286
附錄 287
一、生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)須知 287
二、玻璃儀器的洗滌及一些常用的洗滌劑 288
三、移液器的使用 289
四、吸管的使用 290
五、過濾和離心 291
六、930型熒光光度計(jì)的使用 292
七、UV2600紫外可見分光光度計(jì)的使用 293
八、Nano-200超微量核酸分析儀 296
九、自動(dòng)生化分析儀 298
十、全自動(dòng)免疫分析儀TOSOH AIA 2000標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程 298
十一、血紅蛋白檢測儀Bio-Rad D-10標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程 298
十二、實(shí)驗(yàn)室常用酸堿的相對(duì)密度和濃度 298
十三、常用酸堿指示劑 298
十四、緩沖液的配制 299
十五、恒沸鹽酸的制備 305
十六、大腸桿菌丙酮粉的制備 305
十七、生物化學(xué)中某些重要化合物的Mr及pK值 305
十八、氨基酸的一些物理常數(shù) 307
十九、某些蛋白質(zhì)的物理性質(zhì) 308
二十、化學(xué)元素的相對(duì)原子質(zhì)量表 309
二十一、離心機(jī)轉(zhuǎn)速（r/min）與相對(duì)離心力（RCF）的換算 310
二十二、硫酸銨飽和度的常用表 312
二十三、常用離子交換劑 313
二十四、常用凝膠過濾層析介質(zhì) 315
主要參考文獻(xiàn) 317