石榴多酚的生物學(xué)活性研究

第1章 石榴多酚的生物學(xué)活性概述 1
1.1 石榴概述 1
1.2 石榴多酚及其主要活性成分 2
1.3 石榴多酚的生物學(xué)活性 4
第2章 石榴汁降血脂的研究 12
2.1 材料與儀器 13
2.1.1 試驗材料 13
2.1.2 試驗儀器 14
2.2 試驗方法 14
2.2.1 實驗動物及飼料配方 14
2.2.2 總酚含量的測定 15
2.2.3 黃酮類物質(zhì)含量測定 16
2.2.4 原花青素含量的測定 17
2.2.5 清除DPPH自由基的能力測定 18
2.2.6 實驗動物分組及處理 19
2.2.7 血清血脂指標(biāo)測定 20
2.2.8 肝臟指數(shù)的測定 21
2.2.9 血液抗氧化指標(biāo)的測定 21
2.2.10 主動脈弓病理切片HE染色 21
2.2.11 數(shù)據(jù)處理 21
2.3 結(jié)果與分析 22
2.3.1 石榴汁多酚類成分含量 22
2.3.2 石榴汁清除DPPH自由基的能力 23
2.3.3 石榴汁對AS大鼠血脂的影響 24
2.3.4 石榴汁對AS大鼠ALT、AST和肝臟指數(shù)的影響 25
2.3.5 石榴汁對大鼠CRP的影響 26
2.3.6 石榴汁對大鼠血清總膽汁酸的影響 27
2.3.7 石榴汁對AS大鼠動脈粥樣硬化指數(shù)的影響 29
2.3.8 石榴汁對AS大鼠脂質(zhì)和蛋白質(zhì)氧化的影響 29
2.3.9 主動脈弓標(biāo)本HE染色 31
2.4 討論 32
2.5 小結(jié) 34
第3章 石榴多酚抑制泡沫細胞脂質(zhì)積累的研究 35
3.1 材料與儀器 37
3.1.1 試驗材料與試劑 37
3.1.2 試驗儀器 39
3.2 試驗方法 41
3.2.1 試劑配制 41
3.2.2 石榴皮多酚提取物高效液相色譜分析 43
3.2.3 小鼠巨噬細胞Raw264.7的培養(yǎng) 43
3.2.4 石榴皮多酚對小鼠巨噬細胞Raw264.7存活率的影響 44
3.2.5 Raw264.7巨噬泡沫細胞模型的建立 45
3.2.6 石榴皮多酚對Raw264.7泡沫細胞內(nèi)膽固醇蓄積的影響 45
3.2.7 石榴皮多酚對泡沫細胞清道夫受體基因mRNA表達的影響 47
3.2.8 石榴皮多酚對泡沫細胞清道夫受體蛋白表達的影響 53
3.2.9 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析 57
3.3 結(jié)果與分析 57
3.3.1 HPLC鑒定石榴皮多酚組成成分 57
3.3.2 石榴皮多酚對Raw264.7巨噬細胞的安全濃度 57
3.3.3 Raw264.7巨噬細胞源性泡沫細胞模型的建立 59
3.3.4 石榴皮多酚對泡沫細胞內(nèi)膽固醇含量的影響 60
3.3.5 石榴皮多酚對泡沫細胞清道夫受體CD36和SR-A mRNA和蛋白表達的影響 63
3.3.6 對PPARγ的影響 67
3.4 討論 69
3.5 小結(jié) 72
第4章 石榴多酚促進泡沫細胞膽固醇流出的研究 73
4.1 材料與儀器 81
4.1.1 試驗材料 81
4.1.2 試驗儀器 81
4.2 試驗方法 83
4.2.1 試劑配制 83
4.2.2 Raw264.7巨噬泡沫細胞模型的建立 83
4.2.3 石榴皮多酚對ApoA-1及HDL介導(dǎo)的泡沫細胞膽固醇流出影響 83
4.2.4 石榴皮多酚對泡沫細胞膽固醇流出相關(guān)基因表達的影響 84
4.2.5 膽固醇流出相關(guān)基因引物設(shè)計 84
4.2.6 細胞ACAT和nCEH 蛋白表達及其酶活性的檢測 85
4.2.7 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析 85
4.3 結(jié)果與分析 86
4.3.1 石榴皮多酚對ApoA-1及HDL介導(dǎo)的泡沫細胞膽固醇流出影響 86
4.3.2 石榴皮多酚對泡沫細胞ABCA1、ABCG1 mRNA和蛋白表達影響 87
4.3.3 石榴皮多酚對泡沫細胞SR-B1蛋白表達影響 91
4.3.4 石榴皮多酚對泡沫細胞LXRα基因表達影響 92
4.3.5 石榴皮多酚對泡沫細胞ACAT和nCEH的影響 96
4.4 討論 99
4.5 小結(jié) 102
第5章 安石榴苷、鞣花酸和沒食子酸抑制泡沫細胞形成的研究 103
5.1 材料和儀器 104
5.1.1 試驗材料 104
5.1.2 試驗儀器 104
5.2 試驗方法 106
5.2.1 試劑配制 106
5.2.2 PC、EA和GA對Raw264.7巨噬細胞存活率的影響 106
5.2.3 PC、EA和GA對泡沫細胞膽固醇蓄積和流出的影響 107
5.2.4 PC對泡沫細胞膽固醇流入和流出相關(guān)蛋白表達的影響 108
5.2.5 統(tǒng)計分析 108
5.3 結(jié)果與分析 109
5.3.1 PC、EA、GA對小鼠巨噬細胞Raw264.7的安全濃度 109
5.3.2 PC、EA和GA對泡沫細胞內(nèi)膽固醇含量的影響 110
5.3.3 PC、EA和GA對泡沫細胞清道夫受體CD36基因蛋白表達的影響 113
5.3.4 PC、EA和GA對泡沫細胞膽固醇流出的影響 115
5.3.5 PC、EA和GA對Raw264.7巨噬泡沫細胞PPARγ、LXRα、ABCA1和ABCG1蛋白表達的影響 117
5.4 討論 120
5.5 小結(jié) 122
第6章 石榴鞣花酸抗肺癌的研究 123
6.1 材料與儀器 124
6.1.1 試驗材料 124
6.1.2 試驗儀器 124
6.2 試驗方法 125
6.2.1 石榴鞣花酸提取物溶液配制及細胞培養(yǎng) 125
6.2.2 細胞增殖抑制試驗 126
6.2.3 DAPI染色法分析細胞形態(tài) 126
6.2.4 細胞周期的檢測 127
6.2.5 細胞凋亡率的檢測 127
6.2.6 細胞內(nèi)蛋白表達量的測定 128
6.2.7 數(shù)據(jù)分析 129
6.3 結(jié)果與分析 130
6.3.1 石榴鞣花酸提取物對A549肺癌細胞增殖的抑制作用 130
6.3.2 石榴鞣花酸提取物對A549肺癌細胞形態(tài)的影響 131
6.3.3 石榴鞣花酸提取物對A549肺癌細胞周期的影響 132
6.3.4 石榴鞣花酸提取物對A549肺癌細胞凋亡的影響 133
6.3.5 蛋白質(zhì)印跡法檢測凋亡相關(guān)蛋白表達量的結(jié)果 135
6.4 小結(jié) 137
附錄 縮寫詞中英文對照表 138
參考文獻 141