大青楊抗逆基因工程育種

目錄
前言
1　大青楊及其研究概述　1
1.1　青楊組織培養(yǎng)的研究概述　1
1.1.1　青楊基因資源　1
1.1.2　青楊組織培養(yǎng)研究進(jìn)展　2
1.1.3　組織培養(yǎng)過程中的影響因素　3
1.2　楊樹基因工程的研究　5
1.2.1　林木的遺傳轉(zhuǎn)化方法　5
1.2.2　楊樹抗逆基因工程的研究進(jìn)展　6
1.3 　大青楊抗逆分子基礎(chǔ)研究的意義　7
參考文獻(xiàn)　8
2　大青楊遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立　11
2.1　大青楊組培體系的建立　11
2.1.1　外植體的選擇和消毒　11
2.1.2　不定芽的誘導(dǎo)及增殖　11
2.2　遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立　12
2.2.1　構(gòu)建表達(dá)載體　12
2.2.2　根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法不同參數(shù)對轉(zhuǎn)化效率的影響　13
2.3　轉(zhuǎn)基因植株的篩選和分子檢測　16
參考文獻(xiàn)　18
3　大青楊PuHSFA4a響應(yīng)高鋅脅迫的機(jī)制研究　19
3.1　大青楊PuHSFA4a基因及其啟動子的表達(dá)研究　19
3.1.1　實驗材料　19
3.1.2　實驗結(jié)果和分析　19
3.1.3　小結(jié)　24
3.2　大青楊PuHSFA4a基因的抗高鋅功能研究　24
3.2.1　實驗材料　24
3.2.2　實驗結(jié)果和分析　24
3.2.3　小結(jié)　37
3.3　大青楊PuHSFA4a調(diào)控下游基因表達(dá)的分析　37
3.3.1　實驗材料　37
3.3.2　實驗結(jié)果和分析　38
3.3.3　小結(jié)　43
3.4　PuHSFA4a下游靶基因PuGSTU17和PuPLA2的鑒定　43
3.4.1　實驗材料　43
3.4.2　實驗結(jié)果和分析　43
3.4.3　小結(jié)　50
3.5　PuGSTU17和PuPLA2基因功能驗證　51
3.5.1　實驗材料　51
3.5.2　實驗結(jié)果和分析　51
3.5.3　小結(jié)　64
參考文獻(xiàn)　66
4　大青楊Pu-miR172d響應(yīng)干旱脅迫的機(jī)制研究　69
4.1　小黑楊花芽發(fā)育相關(guān)miRNA的鑒定　69
4.1.1　實驗材料　69
4.1.2　實驗結(jié)果與分析　69
4.1.3　小結(jié)　82
4.2　大青楊Pu-miR172d在干旱脅迫下的功能研究　82
4.2.1　實驗材料　82
4.2.2　實驗結(jié)果與分析　82
4.2.3　小結(jié)　100
4.3　Pu-miR172d調(diào)控下游基因的分析鑒定　100
4.3.1　實驗材料　100
4.3.2　實驗結(jié)果與分析　101
4.3.3　小結(jié)　107
4.4　大青楊PuGTL1在干旱脅迫下的功能研究　108
4.4.1　實驗材料　108
4.4.2　實驗結(jié)果與分析　108
4.4.3　小結(jié)　121
參考文獻(xiàn)　121
5　LbDREB6在大青楊中響應(yīng)干旱和病原菌脅迫的機(jī)制研究　123
5.1　LbDREB6過表達(dá)對轉(zhuǎn)基因楊樹生長的影響　123
5.1.1　實驗材料　123
5.1.2　實驗結(jié)果　123
5.1.3　小結(jié)　126
5.2　不同表達(dá)水平的LbDREB6對大青楊抗旱性的影響及下游靶基因表達(dá)的比較　126
5.2.1　實驗材料　126
5.2.2　實驗結(jié)果　126
5.2.3　小結(jié)　129
5.3　不同表達(dá)水平LbDREB6對大青楊細(xì)菌病原體易感性的影響及轉(zhuǎn)錄組分析　131
5.3.1　實驗材料　131
5.3.2　實驗結(jié)果　131
5.3.3　小結(jié)　134
參考文獻(xiàn)　135
6　大青楊PuHox52調(diào)控不定根形成的分子機(jī)制研究　136
6.1　茉莉素對楊樹不定根形成的影響　136
6.1.1　實驗材料　136
6.1.2　實驗結(jié)果　136
6.1.3　小結(jié)　140
6.2　大青楊PuHox52基因及其啟動子的研究　141
6.2.1　實驗材料　141
6.2.2　實驗結(jié)果　141
6.2.3　小結(jié)　150
6.3　PuHox52調(diào)控大青楊不定根形成的研究　151
6.3.1　實驗材料　151
6.3.2　實驗結(jié)果　151
6.3.3　小結(jié)　158
6.4　PuHox52調(diào)控不定根形成的下游基因鑒定分析　159
6.4.1　實驗材料　159
6.4.2　實驗結(jié)果　159
6.4.3　小結(jié)　164
6.5　PuHox52結(jié)合下游靶基因驗證　168
6.5.1　實驗材料　168
6.5.2　實驗結(jié)果　168
6.5.3　小結(jié)　180
參考文獻(xiàn)　182