基因工程：動(dòng)物細(xì)胞制藥關(guān)鍵技術(shù)

第一章  動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)      001
第一節(jié)  動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基礎(chǔ)知識(shí)    002
一、基本概念    002
二、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件    003
三、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室    004
四、無(wú)菌技術(shù)    006
第二節(jié)  動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)    007
一、動(dòng)物細(xì)胞凍存與復(fù)蘇    007
二、動(dòng)物細(xì)胞傳代    009
三、動(dòng)物細(xì)胞懸浮馴化及無(wú)血清培養(yǎng)    011
四、動(dòng)物細(xì)胞分批培養(yǎng)    015
五、動(dòng)物細(xì)胞補(bǔ)料分批培養(yǎng)    016
六、動(dòng)物細(xì)胞灌流技術(shù)培養(yǎng)    022
第三節(jié)  動(dòng)物細(xì)胞生物特性分析    025
一、動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)曲線和倍增時(shí)間分析    025
二、動(dòng)物細(xì)胞增殖測(cè)定    028
三、動(dòng)物細(xì)胞凋亡檢測(cè)    031
四、動(dòng)物細(xì)胞周期檢測(cè)    036
參考文獻(xiàn)    038
第二章  動(dòng)物細(xì)胞載體    041
第一節(jié)  質(zhì)粒載體構(gòu)建    042
一、目的基因獲取    042
二、限制性內(nèi)切酶酶切    046
三、目的片段和載體連接    048
四、重組子轉(zhuǎn)化    050
五、重組載體篩選    052
六、重組載體鑒定    052
第二節(jié)  病毒載體構(gòu)建    056
一、桿狀病毒表達(dá)載體    056
二、慢病毒載體    057
三、腺病毒載體    059
四、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體    060
參考文獻(xiàn)    061
第三章  目的基因?qū)?   065
第一節(jié)  動(dòng)物細(xì)胞轉(zhuǎn)染    066
一、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染    066
二、聚乙烯亞胺轉(zhuǎn)染    067
三、電穿孔轉(zhuǎn)染    068
四、影響細(xì)胞轉(zhuǎn)染的因素    069
第二節(jié)  細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率檢測(cè)    070
一、流式細(xì)胞儀檢測(cè)    071
二、熒光顯微鏡檢測(cè)    071
參考文獻(xiàn)    072
第四章  重組穩(wěn)定細(xì)胞株篩選和評(píng)估    075
第一節(jié)  重組穩(wěn)定細(xì)胞池篩選    076
一、常用的抗生素篩選標(biāo)記    076
二、遺傳霉素篩選    078
三、DHFR篩選    079
四、GS篩選    080
第二節(jié)  重組單克隆細(xì)胞株分離    081
一、有限稀釋法    081
二、流式細(xì)胞熒光分選技術(shù)    082
三、ClonePix    083
四、克隆環(huán)法    084
五、其他篩選方法    085
第三節(jié)  重組穩(wěn)定細(xì)胞系評(píng)估    086
一、細(xì)胞污染檢測(cè)    086
二、細(xì)胞系鑒定    087
三、外源基因整合分析    089
四、重組蛋白表達(dá)分析    098
參考文獻(xiàn)    101
第五章  重組蛋白分離純化     103
第一節(jié)  重組蛋白純化策略及設(shè)備    104
一、重組蛋白純化策略    104
二、重組蛋白純化設(shè)備    107
第二節(jié)  重組蛋白沉淀和膜分離技術(shù)    116
一、蛋白質(zhì)沉淀法    117
二、膜分離技術(shù)    118
第三節(jié)  重組蛋白分離色譜技術(shù)    119
一、親和色譜法    120
二、疏水色譜法    122
三、凝膠過(guò)濾色譜法    124
四、離子交換色譜法    126
五、反相色譜法    129
參考文獻(xiàn)    131
第六章  重組蛋白藥物鑒定與分析     135
第一節(jié)  蛋白質(zhì)理化特性    136
一、分子量測(cè)定    136
二、等電點(diǎn)與電荷異質(zhì)性分析    141
三、肽圖分析    144
四、氨基酸組成分析    145
五、N端氨基酸測(cè)序    150
六、C端氨基酸測(cè)序    152
七、二硫鍵分析    153
八、高級(jí)結(jié)構(gòu)分析    155
第二節(jié)  蛋白質(zhì)含量分析    159
一、凱氏定氮法    159
二、Lowry法    161
三、BCA法    162
四、Bradford法    164
五、紫外吸收法    166
六、高效液相色譜法    166
第三節(jié)  蛋白質(zhì)純度分析    168
一、宿主細(xì)胞蛋白殘留分析    168
二、宿主細(xì)胞DNA殘留分析    170
三、殘留抗生素檢測(cè)    172
四、其他成分檢測(cè)    173
第四節(jié)  糖基化修飾分析    181
一、分離富集親和技術(shù)    182
二、糖蛋白鑒定/糖基化位點(diǎn)的確定方法    187
三、糖鏈結(jié)構(gòu)分析    189
第五節(jié)  生物學(xué)活性測(cè)定    206
一、體外法評(píng)估    207
二、體內(nèi)法評(píng)估    211
第六節(jié)  免疫化學(xué)特性分析    213
一、親和力測(cè)定    213
二、抗原結(jié)合表位測(cè)定    217
參考文獻(xiàn)    219
第七章  重組蛋白藥物新技術(shù)      223
第一節(jié)  人工智能與蛋白藥物設(shè)計(jì)    224
一、核苷酸及蛋白質(zhì)相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)    224
二、基因信息分析及密碼子優(yōu)化    226
三、蛋白質(zhì)信息分析及結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)    241
四、人工智能設(shè)計(jì)    255
第二節(jié)  miRNA篩選與應(yīng)用    269
一、miRNA篩選    269
二、miRNA應(yīng)用    273
第三節(jié)  基因編輯技術(shù)    279
一、動(dòng)物細(xì)胞CRISPR基因敲除    279
二、動(dòng)物細(xì)胞基因敲入    289
第四節(jié)  表觀遺傳學(xué)技術(shù)    299
一、DNA甲基化分析    299
二、組蛋白修飾分析    305
三、非編碼RNA分析    314
第五節(jié)  DNA與蛋白質(zhì)相互作用分析    323
一、凝膠遷移實(shí)驗(yàn)    323
二、DNaseⅠ足跡實(shí)驗(yàn)    330
三、酵母單雜交系統(tǒng)    337
四、染色質(zhì)免疫沉淀    351
五、噬菌體展示技術(shù)（DNA與蛋白質(zhì)相互作用）    354
參考文獻(xiàn)    356
附錄1  常用緩沖液及試劑的配制    363
附錄2  中英文詞匯表    369