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內(nèi)容簡(jiǎn)介

　　本書一版廣受讀者歡迎。新版延續(xù)第一版內(nèi)容特色，系統(tǒng)介紹現(xiàn)代分子生物學(xué)各種傳統(tǒng)和新型的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，涵蓋核酸提取技術(shù)、目的基因的獲取及鑒定技術(shù)、載體的構(gòu)建與鑒定技術(shù)、細(xì)菌轉(zhuǎn)化與細(xì)菌轉(zhuǎn)染技術(shù)、外源基因表達(dá)的鑒定技術(shù)、報(bào)告基因分析技術(shù)、差異基因表達(dá)譜分析技術(shù)、蛋白質(zhì)-核酸相互作用技術(shù)、蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用技術(shù)、微生物體內(nèi)同源重組技術(shù)、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物技術(shù)、基因編輯技術(shù)、微RNA的構(gòu)造及實(shí)驗(yàn)技術(shù)、長(zhǎng)鏈非編碼RNA研究實(shí)驗(yàn)技術(shù)、非編碼RNA數(shù)據(jù)庫(kù)及在線分析工具等。新版增加了CRISPR基因編輯技術(shù)、長(zhǎng)鏈非編碼RNA研究實(shí)驗(yàn)技術(shù)等新內(nèi)容，并對(duì)非編碼RNA數(shù)據(jù)庫(kù)及在線工具一章進(jìn)行重寫。和一版一樣，實(shí)驗(yàn)方案部分強(qiáng)調(diào)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果作具體分析，每個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果都附圖（照片），圖中設(shè)陰陽(yáng)性對(duì)照，對(duì)照?qǐng)D對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行詳細(xì)分析，使讀者對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果一目了然，還指出了每個(gè)技術(shù)的難點(diǎn)和解決辦法。本書是生物、醫(yī)學(xué)領(lǐng)域相關(guān)實(shí)驗(yàn)室的案頭實(shí)驗(yàn)操作工具書，可供從事生命科學(xué)研究和教育的碩士、博士等科技工作者和教學(xué)一線教師日常查閱參考。

作者簡(jiǎn)介

　　葉棋濃，軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院某所科技委主任，研究員，博士生導(dǎo)師。國(guó)家杰出青年科學(xué)基金獲得者，享受國(guó)務(wù)院政府特殊津貼。中國(guó)生物工程學(xué)會(huì)副秘書長(zhǎng)、中國(guó)生物工程學(xué)會(huì)醫(yī)學(xué)生物技術(shù)專業(yè)委員會(huì)主任委員、中國(guó)分析測(cè)試協(xié)會(huì)標(biāo)記免疫分析專業(yè)委員會(huì)副主任委員。Frontiers in Cell and Developmental Biology和Frontiers in Oncology雜志副主編，Science Bulletin雜志特邀編委。主要從事腫瘤發(fā)生、侵襲、轉(zhuǎn)移、耐藥相關(guān)基因功能及機(jī)制研究，發(fā)現(xiàn)了新的調(diào)控重要信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的基因和非編碼RNA，為腫瘤的診斷和治療提供候選靶標(biāo)。以通訊作者在Cancer Cell、Nature Communications、Science Advances、Journal of Clinical Investigation、Advanced Science、Science Bulletin、STTT等SCI雜志上發(fā)表文章90余篇。獲北京市科學(xué)技術(shù)一等獎(jiǎng)1項(xiàng)，軍隊(duì)科技進(jìn)步二等獎(jiǎng)1項(xiàng)。

圖書目錄

第一章分子生物學(xué)技術(shù)概述1
一、引言1
二、目的基因的獲取1
三、克隆載體的選擇2
四、載體的轉(zhuǎn)化2
五、重組子的篩選3
六、基因表達(dá)4
七、生物工程技術(shù)的應(yīng)用5
參考文獻(xiàn)6
第二章核酸提取技術(shù)7
第一節(jié)質(zhì)粒DNA的提取7
一、引言7
二、堿裂解法小量質(zhì)粒提取所需的儀器、材料及基本步驟8
三、Promega質(zhì)粒DNA小量提取試劑盒操作程序9
四、注意事項(xiàng)9
五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明10
六、疑難解析10
第二節(jié)基因組DNA的提取12
一、引言12
二、從植物組織提取基因組DNA13
三、從動(dòng)物組織提取基因組DNA14
四、細(xì)菌基因組DNA的制備14
五、用DNA提取試劑盒從全血和組織中提取基因組DNA15
六、注意事項(xiàng)17
七、實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明17
八、疑難解析18
第三節(jié)RNA的提取19
一、引言19
二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路和基本步驟20
三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明24
四、疑難解析24
參考文獻(xiàn)25
第三章目的基因的獲取及鑒定技術(shù)26
第一節(jié)普通PCR26
一、普通PCR的基本概念和原理26
二、普通PCR技術(shù)的實(shí)驗(yàn)方法27
三、疑難解析32
第二節(jié)實(shí)時(shí)熒光定量PCR33
一、實(shí)時(shí)熒光定量PCR的基本概念和原理33
二、實(shí)時(shí)熒光定量PCR的定量方法36
三、實(shí)時(shí)熒光定量PCR的實(shí)驗(yàn)方法42
四、實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)的應(yīng)用47
五、疑難解析53
第三節(jié)環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增法快速檢測(cè)病原菌55
一、引言55
二、環(huán)介導(dǎo)等溫核酸擴(kuò)增的原理57
三、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路和基本步驟59
四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果66
五、疑難解析69
六、小結(jié)70
參考文獻(xiàn)72
第四章載體的構(gòu)建和鑒定76
第一節(jié)克隆載體76
一、pBR322載體76
二、pUC8——一種Lac選擇型質(zhì)粒78
三、pGEM3Z——克隆DNA的體外轉(zhuǎn)錄78
四、柯斯質(zhì)粒載體78
第二節(jié)表達(dá)載體79
一、原核表達(dá)載體80
二、真核表達(dá)載體82
第三節(jié)載體構(gòu)建中的關(guān)鍵工具和步驟87
一、關(guān)鍵工具87
二、常規(guī)克隆關(guān)鍵步驟89
三、同源重組克隆關(guān)鍵步驟91
第四節(jié)載體構(gòu)建的應(yīng)用舉例92
一、常規(guī)克隆實(shí)驗(yàn)材料92
二、常規(guī)克隆實(shí)驗(yàn)方法93
三、同源重組克隆實(shí)驗(yàn)材料97
四、同源重組克隆實(shí)驗(yàn)方法98
五、疑難問題解析100
參考文獻(xiàn)100
第五章細(xì)菌轉(zhuǎn)化與細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)102
第一節(jié)細(xì)菌轉(zhuǎn)化102
一、基本原理102
二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路和基本步驟103
三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析104
四、疑難解析104
第二節(jié)細(xì)胞轉(zhuǎn)染105
一、基本原理106
二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和基本步驟108
三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析110
四、疑難解析111
參考文獻(xiàn)112
第六章外源基因表達(dá)的鑒定113
第一節(jié)Northern Blot113
一、引言113
二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路和基本步驟113
三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明116
四、疑難解析117
第二節(jié)RT-PCR117
一、引言117
二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路和基本步驟117
三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明120
四、疑難解析120
第三節(jié)Western Blot121
一、引言121
二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路和基本步驟121
三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明126
四、疑難解析126
第四節(jié)ELISA127
一、引言127
二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路和基本步驟129
三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明131
四、疑難解析131
參考文獻(xiàn)132
第七章報(bào)告基因分析134
第一節(jié)報(bào)告基因的定義和種類134
一、報(bào)告基因的定義134
二、常用的報(bào)告基因134
第二節(jié)應(yīng)用報(bào)告基因分析基因的轉(zhuǎn)錄活性135
一、實(shí)驗(yàn)原理135
二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和基本步驟136
三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析137
四、疑難解析140
第三節(jié)報(bào)告基因在動(dòng)物活體成像中的應(yīng)用140
一、實(shí)驗(yàn)原理140
二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和基本步驟142
三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析143
四、疑難解析143
參考文獻(xiàn)145
第八章差異基因表達(dá)譜分析147
第一節(jié)基于雙向電泳技術(shù)的蛋白質(zhì)組學(xué)分析147
一、引言147
二、實(shí)驗(yàn)基本步驟和注意事項(xiàng)147
三、雙向電泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明及疑難解析154
四、質(zhì)譜數(shù)據(jù)分析說明及疑難解析154
五、結(jié)語(yǔ)159
第二節(jié)基因芯片160
一、引言160
二、工作原理161
第三節(jié)基因芯片的制備163
一、概述163
二、探針的選擇和制備163
三、基因芯片基片的選擇和準(zhǔn)備165
四、基因芯片的制作166
第四節(jié)基因芯片的檢測(cè)168
一、基因芯片的雜交和數(shù)據(jù)獲取168
二、基因芯片分析常用的軟件和數(shù)據(jù)庫(kù)169
第五節(jié)基因芯片的應(yīng)用170
一、基因芯片與病原微生物檢測(cè)170
二、基因芯片與腫瘤172
三、基因芯片與藥物研發(fā)174
四、結(jié)語(yǔ)176
參考文獻(xiàn)176
第九章蛋白質(zhì)-核酸相互作用技術(shù)178
第一節(jié)凝膠遷移實(shí)驗(yàn)178
一、引言178
二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與基本步驟179
三、實(shí)驗(yàn)舉例與結(jié)果說明184
四、需要注意的問題186
第二節(jié)染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)187
一、引言187
二、實(shí)驗(yàn)基本步驟188
三、實(shí)驗(yàn)舉例189
四、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)192
第三節(jié)RNA沉降192
一、實(shí)驗(yàn)基本原理192
二、實(shí)驗(yàn)基本思路192
三、實(shí)驗(yàn)舉例說明197
第四節(jié)RIP實(shí)驗(yàn)198
一、實(shí)驗(yàn)基本原理198
二、實(shí)驗(yàn)思路199
三、注意事項(xiàng)200
四、實(shí)驗(yàn)舉例說明201
參考文獻(xiàn)201
第十章蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用技術(shù)202
第一節(jié)運(yùn)用酵母雙雜交技術(shù)篩選與靶蛋白相互作用的蛋白質(zhì)202
一、引言202
二、實(shí)驗(yàn)儀器及材料203
三、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)流程204
四、實(shí)驗(yàn)方法204
五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明210
六、疑難解析214
第二節(jié)GST沉降214
一、實(shí)驗(yàn)基本原理214
二、實(shí)驗(yàn)基本步驟215
三、實(shí)驗(yàn)舉例217
四、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)221
第三節(jié)免疫共沉淀222
一、引言222
二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和基本步驟223
三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果舉例225
四、需要注意的問題227
第四節(jié)細(xì)胞共定位228
一、引言228
二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和基本步驟228
三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果舉例說明229
四、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)230
參考文獻(xiàn)231
第十一章微生物體內(nèi)同源重組技術(shù)232
第一節(jié)傳統(tǒng)的大腸桿菌體內(nèi)同源重組方法（RecA重組系統(tǒng)）232
一、引言232
二、利用RecA重組系統(tǒng)構(gòu)建痢疾桿菌hns基因插入突變體232
三、RecA重組系統(tǒng)構(gòu)建突變體的其他方法235
四、存在的問題和解決方法236
五、小結(jié)236
第二節(jié)Red/ET重組系統(tǒng)237
一、引言237
二、痢疾桿菌hns基因缺失突變體的構(gòu)建238
三、Red同源重組技術(shù)應(yīng)用策略241
四、應(yīng)用Gap-Repair克隆技術(shù)構(gòu)建pBR322-Red載體242
五、Red/ET重組系統(tǒng)的其他應(yīng)用244
六、小結(jié)245
參考文獻(xiàn)245
第十二章轉(zhuǎn)基因動(dòng)物技術(shù)247
第一節(jié)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物概述247
一、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的概念247
二、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的分類247
三、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的命名248
四、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物技術(shù)的基本原理249
五、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的安全性和倫理學(xué)問題250
六、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物技術(shù)的發(fā)展概況251
第二節(jié)顯微注射法制備轉(zhuǎn)基因動(dòng)物252
一、儀器設(shè)備及材料和試劑252
二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物準(zhǔn)備253
三、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物制備方法254
四、影響轉(zhuǎn)基因動(dòng)物產(chǎn)生效率的因素257
第三節(jié)利用ES細(xì)胞制備轉(zhuǎn)基因動(dòng)物258
一、ES細(xì)胞的研究歷史258
二、ES細(xì)胞的生物學(xué)特性258
三、ES細(xì)胞分離培養(yǎng)的基本方法259
四、ES細(xì)胞的遺傳修飾263
五、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物制備270
參考文獻(xiàn)271
第十三章基因編輯技術(shù)272
第一節(jié)基因打靶技術(shù)273
一、基因打靶技術(shù)的原理273
二、利用同源重組構(gòu)建基因打靶動(dòng)物模型的基本步驟273
三、基因打靶的策略276
四、基因打靶的生物學(xué)意義和應(yīng)用前景287
第二節(jié)CRISPR/Cas9系統(tǒng)288
一、CRISPR/Cas系統(tǒng)的簡(jiǎn)介及其作用原理288
二、TypeⅡ CRISPR/Cas9系統(tǒng)289
三、CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)的應(yīng)用舉例291
四、CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)的應(yīng)用前景295
第三節(jié)CRISPR/Cas13系統(tǒng)296
一、CRISPR/Cas13系統(tǒng)的介紹296
二、實(shí)驗(yàn)基本步驟296
三、注意事項(xiàng)298
四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明298
五、疑難解析300
參考文獻(xiàn)300
第十四章流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)方法305
一、引言305
二、實(shí)驗(yàn)方法308
三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析313
四、流式細(xì)胞分析的質(zhì)量控制323
參考文獻(xiàn)325
第十五章干細(xì)胞的分離培養(yǎng)與誘導(dǎo)分化327
第一節(jié)人胎盤來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)與純化327
一、引言327
二、材料、試劑與主要儀器設(shè)備328
三、實(shí)驗(yàn)方法329
四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果332
五、注意事項(xiàng)337
第二節(jié)小鼠間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)與純化338
一、引言338
二、骨髓法339
三、密質(zhì)骨法339
第三節(jié)人胚胎干細(xì)胞的培養(yǎng)348
一、引言348
二、實(shí)驗(yàn)材料348
三、實(shí)驗(yàn)方法348
四、注意事項(xiàng)352
第四節(jié)CD34 造血干細(xì)胞與CD14 單核細(xì)胞向樹突狀細(xì)胞的誘導(dǎo)分化353
一、引言353
二、實(shí)驗(yàn)材料與方法354
三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果357
四、注意事項(xiàng)359
參考文獻(xiàn)359
第十六章微RNA的構(gòu)造及實(shí)驗(yàn)技術(shù)364
第一節(jié)miRNA克隆364
一、材料與設(shè)備365
二、實(shí)驗(yàn)方法365
三、疑難解析368
第二節(jié)miRNA Northern Blot368
一、材料與設(shè)備368
二、實(shí)驗(yàn)方法369
三、疑難解析369
第三節(jié)miRNA原位雜交370
一、材料與設(shè)備370
二、實(shí)驗(yàn)方法371
三、疑難解析371
第四節(jié)基于poly（A）加尾的miRNA RT-PCR372
一、材料與設(shè)備372
二、實(shí)驗(yàn)方法373
三、疑難解析374
第五節(jié)miRNA功能研究375
一、miRNA表達(dá)檢測(cè)375
二、miRNA功能篩選鑒定376
三、miRNA靶基因鑒定377
四、miRNA非經(jīng)典功能378
第六節(jié)siRNA的構(gòu)造及實(shí)驗(yàn)研究379
一、引言379
二、如何進(jìn)行RNAi實(shí)驗(yàn)381
三、常用RNAi實(shí)驗(yàn)的基本步驟384
四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明388
五、疑難解析389
參考文獻(xiàn)390
第十七章長(zhǎng)鏈非編碼RNA研究實(shí)驗(yàn)技術(shù)392
第一節(jié)lncRNA克隆392
一、材料與設(shè)備393
二、實(shí)驗(yàn)方法393
三、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)396
第二節(jié)lncRNA Northern Blot396
一、材料與設(shè)備396
二、實(shí)驗(yàn)方法396
三、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)397
第三節(jié)lncRNA原位雜交398
一、材料與設(shè)備398
二、實(shí)驗(yàn)方法398
三、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)399
第四節(jié)lncRNA定量檢測(cè)400
一、材料與設(shè)備400
二、實(shí)驗(yàn)方法400
三、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)400
第五節(jié)lncRNA-蛋白質(zhì)互作研究技術(shù)401
一、RNA pull-down鑒定特定lncRNA結(jié)合的蛋白質(zhì)401
二、RIP鑒定特定蛋白質(zhì)結(jié)合的lncRNA免疫沉淀技術(shù)404
三、CLIP鑒定蛋白質(zhì)與lncRNA的結(jié)合位點(diǎn)405
四、ChIRP鑒定與lncRNA結(jié)合的蛋白質(zhì)/DNA408
參考文獻(xiàn)412
第十八章非編碼RNA數(shù)據(jù)庫(kù)及在線分析工具介紹414
第一節(jié)綜合性非編碼RNA數(shù)據(jù)庫(kù)414
一、概論414
二、非編碼RNA相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)415
三、小結(jié)425
第二節(jié)miRNA相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)及預(yù)測(cè)工具425
一、概論425
二、miRNA相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)425
三、miRNA相關(guān)預(yù)測(cè)工具434
四、小結(jié)442
第三節(jié)rRNA相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)及預(yù)測(cè)工具442
一、概述442
二、rRNA相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)442
三、rRNA相關(guān)預(yù)測(cè)工具448
四、小結(jié)449
第四節(jié)sRNA相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)及預(yù)測(cè)工具450
一、概述450
二、sRNA相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)450
三、sRNA靶標(biāo)相關(guān)預(yù)測(cè)工具452
四、小結(jié)454
第五節(jié)siRNA相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)454
一、概述454
二、siRNA相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)454
第六節(jié)tRNA相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)及預(yù)測(cè)工具460
一、概述460
二、tRNA相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)460
三、tRNA相關(guān)預(yù)測(cè)工具470
四、小結(jié)472
第七節(jié)snoRNA相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)及預(yù)測(cè)工具472
一、概述472
二、snoRNA相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)472
三、snoRNA相關(guān)預(yù)測(cè)工具473
四、小結(jié)476
第八節(jié)lncRNA及circRNA相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)477
一、概論477
二、lncRNA及circRNA相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)477
三、小結(jié)497
參考文獻(xiàn)498