酒酒球菌β-葡萄糖苷酶的研究與應(yīng)用

第1章 緒論  1 
1.1 β-葡萄糖苷酶簡介  1
1.1.1 β-葡萄糖苷酶的分類    1
1.1.2 β-葡萄糖苷酶的理化性質(zhì)  2
1.1.3 β-葡萄糖苷酶酶活性的測定方法  3
1.1.4 β-葡萄糖苷酶的結(jié)構(gòu)與功能  4
1.1.5 β-葡萄糖苷酶的一般催化機(jī)制  6
1.2 不同來源的β-葡萄糖苷酶研究進(jìn)展  8
1.2.1 動(dòng)物來源的β-葡萄糖苷酶  8
1.2.2 植物來源的β-葡萄糖苷酶  9
1.2.3 微生物來源的β-葡萄糖苷酶  11
1.3 β-葡萄糖苷酶在食品工業(yè)中的應(yīng)用  14
1.3.1 茶葉增香  16 
1.3.2 果汁增香  17 
1.3.3 葡萄酒增香  18 
第2章　酒酒球菌β-葡萄糖苷酶的同源分析  20
2.1 基因的同源分析  20 
2.1.1 序列獲取  20 
2.1.2 理化性質(zhì)分析  21 
2.1.3 保守結(jié)構(gòu)域和Motif分析  21
2.1.4 進(jìn)化樹構(gòu)建  21 
2.2 同源分析結(jié)果  22 
2.2.1 理化性質(zhì)分析結(jié)果  22 
2.2.2 保守結(jié)構(gòu)域和Motif分析結(jié)果  23
2.2.3 同源關(guān)系分析結(jié)果  26 
2.3 討論  27 
2.4 本章小結(jié)  28 
第3章　酒酒球菌β-葡萄糖苷酶的異源表達(dá)和純化  29
3.1 酶的異源表達(dá)和純化  30 
3.1.1 試驗(yàn)材料與儀器  30 
3.1.2 主要儀器  30 
3.1.3 表達(dá)載體的構(gòu)建  31 
3.1.4 表達(dá)目的蛋白  37 
3.1.5 分離純化目的蛋白  38 
3.1.6 酶活性測定  39 
3.2 酶的異源表達(dá)與分離純化結(jié)果分析  40 
3.2.1 基因組DNA的提取  40
3.2.2 目的基因的克隆表達(dá)  41 
3.2.3 重組酶BGL0224的分離純化  44
3.3 討論  46 
3.4 本章小結(jié)  49 
第4章　重組β-葡萄糖苷酶BGL0224的酶學(xué)性質(zhì)表征  51
4.1 重組酶BGL0224的酶學(xué)性質(zhì)表征  52
4.1.1 試驗(yàn)材料與試劑  52 
4.1.2　主要儀器  52 
4.1.3 生物信息學(xué)分析  52 
4.1.4 最適反應(yīng)溫度及熱穩(wěn)定性測定  53 
4.1.5 最適反應(yīng)pH及pH穩(wěn)定性測定  53
4.1.6 最適乙醇濃度及乙醇耐受性測定  54 
4.1.7 不同添加物對(duì)BGL0224酶活性的影響  54
4.1.8 結(jié)構(gòu)檢測  55 
4.1.9 酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)常數(shù)測定  56 
4.2 酶學(xué)性質(zhì)的表征結(jié)果與分析  57 
4.2.1 BGL0224的生物信息學(xué)分析  57
4.2.2 BGL0224的基本理化性質(zhì)  60
4.2.3 BGL0224的結(jié)構(gòu)初步表征  63
4.2.4 BGL0224的酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)參數(shù)  65
4.3 討論  67 
4.4 本章小結(jié)  70 
第5章　重組β-葡萄糖苷酶BGL0224的催化機(jī)理探究  72
5.1 重組酶BGL0224的催化機(jī)理研究  73
5.1.1 試驗(yàn)材料與試劑  73 
5.1.2 主要儀器  74 
5.1.3 最適溫度、最適pH測定  75
5.1.4 酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)參數(shù)及活化能Ea測定  75
5.1.5 底物對(duì)重組酶的猝滅機(jī)制和結(jié)合能力檢測  75 
5.1.6 構(gòu)建BGL0224的三維結(jié)構(gòu)模型  75
5.1.7 BGL0224與底物的分子對(duì)接  76
5.1.8 BGL0224與底物的分子動(dòng)力學(xué)模擬  76
5.2 催化機(jī)理研究的結(jié)果與分析  77 
5.2.1 溫度和pH對(duì)BGL0224催化底物的影響  77
5.2.2 BGL0224催化底物的動(dòng)力學(xué)參數(shù)和活化能  78
5.2.3 不同底物對(duì)BGL0224的猝滅機(jī)制和結(jié)合能力  82
5.2.4 BGL0224催化底物p-NPG的分子模擬  85 
5.3 討論  93 
5.4 本章小結(jié)  95 
第6章 重組β-葡萄糖苷酶BGL0224對(duì)赤霞珠葡萄酒品質(zhì)特性的影響  97 
6.1 探究β-葡萄糖苷酶對(duì)葡萄酒品質(zhì)的影響  98
6.1.1 試驗(yàn)材料與試劑  98 
6.1.2 主要儀器  98 
6.1.3 葡萄酒釀造工藝與實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)  99 
6.1.4 電子鼻測定方法  100 
6.1.5 氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS）測定方法  100 
6.1.6 香氣感官評(píng)價(jià)  101 
6.2 結(jié)果與分析  101 
6.2.1 電子鼻分析  101 
6.2.2 GC-MS分析  105
6.2.3 感官評(píng)價(jià)分析  112 
6.3 討論  114 
6.4 本章小結(jié)  117 
第7章　β-葡萄糖苷酶研究展望  118
參考文獻(xiàn)  120 
附錄  135