中國獸藥研究與應用全書：獸用診斷試劑及應用

第1章緒論1
1.1我國養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀2
1.1.1養(yǎng)豬業(yè)2
1.1.2養(yǎng)禽業(yè)3
1.1.3牛羊養(yǎng)殖業(yè)4
1.2我國動物疫病流行現(xiàn)狀及防控策略5
1.2.1主要動物疫病流行現(xiàn)狀5
1.2.2我國動物疫病防控策略10
1.3獸用診斷試劑的發(fā)展歷程19
1.3.1獸用診斷試劑的發(fā)展史19
1.3.2我國獸用診斷試劑的行業(yè)現(xiàn)狀20
1.3.3我國獸用診斷試劑的發(fā)展趨勢22
主要參考文獻23
第2章獸用診斷試劑生物活性原料的研制24
2.1抗原25
2.1.1抗原的定義與分類25
2.1.2天然抗原的研制27
2.1.3重組抗原的研制28
2.1.4合成多肽抗原的研制34
2.2抗體37
2.2.1抗體的定義與分類37
2.2.2多克隆抗體的研制38
2.2.3單克隆抗體的研制40
2.2.4基因工程抗體的研制43
2.3工具酶45
2.3.1工具酶的定義與分類45
2.3.2從天然材料中提取酶47
2.3.3基因工程制備酶49
2.4生物活性原料的純化55
2.4.1生物活性原料的預處理55
2.4.2生物活性原料的初純56
2.4.3生物活性原料的精純59
2.4.4應用62
2.5生物活性原料的保存與質(zhì)量控制63
2.5.1生物活性原料的保存63
2.5.2生物活性原料的質(zhì)量控制64
主要參考文獻66
第3章獸用ELISA類試劑的研制68
3.1概述69
3.2ELISA的基本原理和反應模式69
3.2.1直接ELISA70
3.2.2間接ELISA71
3.2.3競爭ELISA72
3.2.4夾心ELISA78
3.3酶標記物的制備81
3.3.1ELISA中常用酶及其底物系統(tǒng)81
3.3.2酶標記方法85
3.3.3酶標記物的純化與保存89
3.3.4酶標記物的質(zhì)量評價91
3.3.5新型酶的研究進展92
3.4ELISA試劑盒的組成93
3.4.1固相系統(tǒng)93
3.4.2酶標系統(tǒng)96
3.4.3樣品系統(tǒng)97
3.4.4洗滌系統(tǒng)97
3.4.5對照系統(tǒng)98
3.4.6顯色系統(tǒng)99
3.5ELISA類試劑研制的基本原則100
3.5.1反應載體的選擇100
3.5.2緩沖體系的作用及常用緩沖體系100
3.5.3添加劑的作用及常用添加劑103
3.5.4生物活性原料的選擇105
3.5.5反應條件的優(yōu)化106
3.6ELISA類試劑研發(fā)的關鍵點107
3.6.1靶標類型及方法選擇108
3.6.2質(zhì)控品的建立109
3.6.3判界確定112
3.6.4性能評估115
3.7ELISA檢測中的常見問題118
3.7.1樣品收集118
3.7.2實驗環(huán)境和儀器119
3.7.3試劑使用和保管120
3.7.4加樣品及反應試劑120
3.7.5溫育120
3.7.6洗板121
3.7.7顯色121
3.7.8讀值121
3.7.9結果判定122
3.7.10常見問題及分析122
3.8ELISA技術展望123
3.8.1高靈敏度檢測123
3.8.2高通量檢測125
3.8.3自動化檢測125
主要參考文獻125
第4章獸用化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)的研制127
4.1概述128
4.2化學發(fā)光免疫分析的原理及應用128
4.2.1化學發(fā)光原理128
4.2.2化學發(fā)光技術在免疫檢測中的應用129
4.3化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)組成135
4.3.1全自動化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)135
4.3.2化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)關鍵技術指標142
4.4獸用化學發(fā)光免疫反應試劑144
4.4.1化學發(fā)光技術在獸用檢測領域的優(yōu)勢145
4.4.2獸用化學發(fā)光免疫診斷試劑研制流程148
4.4.3應用實例——非洲豬瘟病毒抗體檢測方法（化學發(fā)光法）151
4.5化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)研發(fā)的關鍵點155
4.5.1化學發(fā)光技術中的包被工藝155
4.5.2化學發(fā)光技術中的標記工藝157
4.5.3系統(tǒng)整合技術159
主要參考文獻161
第5章獸用免疫色譜類試劑的研制162
5.1概述163
5.2免疫色譜試紙的結構165
5.2.1樣品墊165
5.2.2結合墊166
5.2.3色譜膜166
5.2.4吸收墊167
5.3免疫色譜試紙的檢測原理167
5.3.1直接法168
5.3.2間接法168
5.3.3競爭法169
5.4LFIA標記物169
5.4.1金納米顆粒170
5.4.2熒光素172
5.4.3磁納米顆粒175
5.4.4上轉(zhuǎn)換納米顆粒177
5.4.5其他標記材料180
5.5免疫色譜試劑研制的基本原則181
5.5.1樣品和檢測靶標的類型181
5.5.2免疫色譜試紙的檢測模式182
5.5.3試紙原料篩選與確定188
5.5.4生物活性原料的篩選與條件優(yōu)化192
5.5.5緩沖體系的作用及常用緩沖體系194
5.5.6添加劑的作用及常用添加劑197
5.5.7試紙反應條件的優(yōu)化197
5.6免疫色譜試劑研制的關鍵點199
5.6.1生物活性原料及其標記技術199
5.6.2蛋白印跡工藝203
5.6.3樣品墊處理206
5.6.4結合墊處理207
5.6.5反應系統(tǒng)的建立及優(yōu)化207
5.6.6試紙貯存208
5.7免疫色譜檢測的常見問題209
5.7.1納米顆粒標記物常見問題及原因209
5.7.2假信號產(chǎn)生的原因210
5.7.3攔截線常見問題及原因211
5.7.4檢測靈敏度問題211
5.8免疫色譜技術展望212
5.8.1高靈敏度檢測212
5.8.2高通量檢測216
5.8.3數(shù)字化檢測217
主要參考文獻218
第6章獸用PCR類試劑的研制221
6.1概述222
6.2PCR檢測技術的原理與分類224
6.2.1PCR的原理及基本概念225
6.2.2幾種常見PCR的原理與應用229
6.2.3熒光PCR的原理及基本概念234
6.2.4幾種常見熒光PCR的原理及應用236
6.3PCR試劑研發(fā)的基本原則245
6.3.1靶基因的選擇246
6.3.2引物的設計247
6.3.3探針類型和設計原則250
6.3.4引物探針的網(wǎng)絡驗證255
6.3.5熒光PCR的試驗誤差256
6.3.6內(nèi)標類型及設置原則260
6.4PCR試劑研發(fā)的關鍵點262
6.4.1樣品采集、處理及核酸提取262
6.4.2對照品和樣品盤的制備及應用266
6.4.3絕對定量方法269
6.4.4相對定量方法273
6.4.5熒光RT-PCR反應體系279
6.5PCR試驗常見的問題289
6.6PCR技術展望290
主要參考文獻292
第7章其他常見獸用診斷技術297
7.1凝集試驗298
7.1.1發(fā)展歷史298
7.1.2反應原理和分類298
7.1.3操作步驟和關鍵點300
7.1.4主要技術特點304
7.2沉淀試驗305
7.2.1發(fā)展歷史305
7.2.2反應原理和分類306
7.2.3操作步驟和關鍵點309
7.2.4主要技術特點314
7.3補體結合試驗315
7.3.1發(fā)展歷史315
7.3.2反應原理和分類315
7.3.3操作步驟和關鍵點317
7.3.4主要技術特點325
7.4中和試驗326
7.4.1發(fā)展歷史327
7.4.2反應原理和分類328
7.4.3操作步驟和關鍵點329
7.4.4主要技術特點332
7.5血凝和血凝抑制試驗332
7.5.1發(fā)展歷史333
7.5.2反應原理和分類333
7.5.3操作步驟和關鍵點334
7.5.4主要技術特點339
7.6間接免疫熒光試驗339
7.6.1發(fā)展歷史340
7.6.2反應原理340
7.6.3操作步驟和關鍵點340
7.6.4主要技術特點342
7.7核酸雜交技術342
7.7.1發(fā)展歷史343
7.7.2反應原理和分類344
7.7.3操作步驟和關鍵點347
7.7.4主要技術特點350
7.8核酸片段多態(tài)性分析350
7.8.1發(fā)展歷史350
7.8.2反應原理和分類351
7.8.3操作步驟和關鍵點358
7.8.4主要技術特點363
主要參考文獻366
第8章新型獸用診斷技術369
8.1蛋白芯片技術370
8.1.1定義和分類370
8.1.2技術特點與應用現(xiàn)狀372
8.1.3產(chǎn)業(yè)化難點和關鍵點377
8.1.4發(fā)展趨勢378
8.2基因芯片技術380
8.2.1定義和分類380
8.2.2技術特點與應用現(xiàn)狀380
8.2.3產(chǎn)業(yè)化難點和關鍵點387
8.2.4發(fā)展趨勢389
8.3微流控技術389
8.3.1定義和分類390
8.3.2技術特點與應用現(xiàn)狀391
8.3.3產(chǎn)業(yè)化難點和關鍵點397
8.3.4發(fā)展趨勢397
8.4量子點技術398
8.4.1定義和分類398
8.4.2量子點的合成和原理400
8.4.3技術特點與應用現(xiàn)狀403
8.4.4產(chǎn)業(yè)化難點和關鍵點405
8.4.5發(fā)展趨勢410
8.5核酸等溫擴增技術410
8.5.1定義和分類410
8.5.2技術特點與應用現(xiàn)狀414
8.5.3產(chǎn)業(yè)化難點和關鍵點416
8.5.4發(fā)展趨勢417
8.6數(shù)字PCR技術418
8.6.1定義和分類418
8.6.2技術特點與應用現(xiàn)狀422
8.6.3產(chǎn)業(yè)化難點和關鍵點426
8.6.4發(fā)展趨勢427
8.7核酸適配體技術428
8.7.1定義和分類428
8.7.2技術特點與應用現(xiàn)狀430
8.7.3產(chǎn)業(yè)化難點和關鍵點436
8.7.4發(fā)展趨勢437
主要參考文獻439
第9章獸用診斷技術國際標準442
9.1國際獸醫(yī)診斷標準概況443
9.1.1世界動物衛(wèi)生組織的發(fā)展歷史444
9.1.2國際動物疫病診斷標準體系445
9.2動物疫病實驗室診斷國際標準447
9.2.1多種動物易感染疫病447
9.2.2豬病458
9.2.3禽類動物疫病463
9.2.4反芻動物疫病472
9.2.5馬病、兔病和其他疫病480
9.2.6抗微生物藥物耐藥性檢測類國際標準481
主要參考文獻484
第10章獸用診斷技術國家和行業(yè)標準485
10.1我國動物衛(wèi)生標準概況486
10.1.1我國動物衛(wèi)生標準的發(fā)展歷史486
10.1.2動物衛(wèi)生標準體系486
10.1.3動物衛(wèi)生標準的作用487
10.2獸用診斷類國家標準488
10.2.1多種動物共患病488
10.2.2豬病492
10.2.3禽病502
10.2.4反芻動物疫病508
10.2.5馬病516
10.2.6犬貓等寵物病519
10.2.7兔病——兔出血癥521
10.3獸用診斷/檢疫/檢測類行業(yè)標準521
10.3.1多種動物共患病521
10.3.2豬病526
10.3.3禽病532
10.3.4反芻動物疫病543
10.3.5馬病551
10.3.6兔病555
10.4獸用診斷技術國家和行業(yè)標準展望556
10.4.1補充完善動物衛(wèi)生標準體系557
10.4.2繼續(xù)提升獸醫(yī)診斷標準質(zhì)量557
10.4.3嚴格認真執(zhí)行動物衛(wèi)生標準557
10.4.4積極開展國際交流與合作558
主要參考文獻558
第11章獸用診斷試劑的注冊560
11.1獸醫(yī)診斷制品注冊相關管理法規(guī)561
11.1.1《獸藥管理條例》561
11.1.2《獸藥注冊辦法》571
11.1.3《獸醫(yī)診斷制品注冊分類及注冊資料要求》575
11.2獸醫(yī)診斷制品的注冊評審程序及要點578
11.2.1獸藥注冊評審工作程序（參照農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公告第392號）578
11.2.2申請人注意事項580
11.2.3注冊評審注意要點583
第12章獸用診斷試劑的生產(chǎn)585
12.1獸用診斷試劑生產(chǎn)廠房與設施586
12.1.1廠房和設施的規(guī)劃586
12.1.2環(huán)境影響評估588
12.1.3廠房和設施的技術要求591
12.1.4GMP對廠房設施的要求602
12.2生產(chǎn)許可證的申請606
12.2.1從事獸藥生產(chǎn)企業(yè)應具備的條件606
12.2.2獸藥生產(chǎn)許可證的管理607
12.2.3審批程序607
12.2.4收回與注銷608
12.3獸用診斷試劑的規(guī)模化生產(chǎn)608
12.3.1規(guī)?；a(chǎn)的一般流程610
12.3.2原輔材料質(zhì)量檢驗621
12.3.3生產(chǎn)指令與標準操作規(guī)程629
12.3.4中試生產(chǎn)與規(guī)?；a(chǎn)632
12.3.5生產(chǎn)過程控制/半成品質(zhì)量控制635
12.3.6中間品/成品質(zhì)量檢驗653
主要參考文獻663
第13章獸用診斷試劑的質(zhì)量控制664
13.1獸醫(yī)檢測方法的驗證原則和方法665
13.1.1檢測方法建立流程665
13.1.2檢測方法確認流程667
13.2不同種類獸用診斷試劑的質(zhì)量控制673
13.2.1酶聯(lián)免疫診斷試劑的質(zhì)量控制673
13.2.2免疫色譜類試劑的質(zhì)量控制676
13.2.3核酸擴增類試劑的質(zhì)量控制678
13.3獸用診斷試劑用質(zhì)量控制物的技術要求680
13.3.1國家標準物質(zhì)680
13.3.2獸藥標準物質(zhì)683
13.3.3體外診斷試劑用質(zhì)控物686
13.3.4獸醫(yī)檢測用核酸標準物質(zhì)的研制689
主要參考文獻695
第14章獸用診斷試劑的應用696
14.1在外來動物疫病監(jiān)測和預防中的應用697
14.1.1進境動物及動物產(chǎn)品檢疫698
14.1.2高風險地區(qū)外來動物疫病監(jiān)測預警698
14.2在新發(fā)突發(fā)動物疫病暴發(fā)流行中的應用699
14.2.1新發(fā)突發(fā)動物疫病確診和疫情確認700
14.2.2暴發(fā)調(diào)查及緊急監(jiān)測702
14.2.3疫情解除封鎖和恢復生產(chǎn)確認704
14.3在本土動物疫病穩(wěn)定控制中的應用705
14.3.1常發(fā)動物疫病監(jiān)測（主動監(jiān)測）705
14.3.2變異病原的監(jiān)測預警707
14.3.3常發(fā)動物疫病診斷（被動監(jiān)測）709
14.3.4免疫效果評價710
14.3.5動物檢疫監(jiān)督711
14.3.6獸用投入品攜帶病原的監(jiān)管713
14.4在動物疫病凈化和消滅中的應用713
14.4.1養(yǎng)殖場疫病凈化和效果評估713
14.4.2區(qū)域凈化和無疫認證718
14.5在動物疫苗研發(fā)與檢驗中的應用718
14.5.1動物疫苗用菌、毒、蟲種鑒定719
14.5.2動物生產(chǎn)用細胞的純凈性檢測720
14.5.3動物疫苗生產(chǎn)用原輔材料的質(zhì)量控制720
14.5.4動物疫苗半成品或成品有效成分的定量721
14.5.5動物疫苗成品的效力檢驗721
14.5.6動物疫苗研發(fā)或檢驗用實驗動物的質(zhì)量控制724
14.6獸用診斷試劑的應用策略725
14.6.1試劑敏感性和特異性的選擇策略726
14.6.2多種類診斷試劑的聯(lián)合應用策略730
14.6.3兼顧科學性和可行性732
14.6.4試劑使用前的充分驗證和使用中的質(zhì)量控制733
14.7獸用診斷試劑的應用展望733
主要參考文獻734